2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、本論文采用硫酸銨分級(jí)沉淀法提取制備了花生總蛋白和Ara h1過敏原蛋白,并免疫動(dòng)物制備了兔、鼠多克隆抗體。針對(duì)花生總蛋白兔、鼠抗血清采用了免疫印跡法分析,證明兔多抗可識(shí)別分子量為63.5、61、57、17和15 kDa的過敏原蛋白,鼠多抗可識(shí)別63.5、61、57 kDa過敏原蛋白。
  優(yōu)化建立了花生總蛋白的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫方法,IC50為1.18μg/mL。
  分別針對(duì)花生總蛋白和Ara h1過敏原蛋白優(yōu)化建立了雙抗體

2、夾心酶聯(lián)免疫分析方法。花生總蛋白的優(yōu)化條件為:捕獲抗體的包被量為0.075μg/孔,封閉液為0.5%脫脂乳粉,花生總蛋白從4μg/mL開始1.5倍梯度稀釋,共7個(gè)梯度,檢測(cè)抗體的稀釋倍數(shù)為1∶25000,HRP標(biāo)記羊抗鼠二抗1∶10000倍稀釋,37℃顯色20 min,檢測(cè)限為40.48 ng/mL。且利用花生總蛋白抗體檢測(cè)Ara h1過敏原蛋白,建立了雙抗體夾心ELISA方法,檢測(cè)限為8.38 ng/mL。
  Ara h1過敏

3、原蛋白的優(yōu)化條件為:捕獲抗體的包被量為0.075μg/孔,封閉液為0.5%脫脂乳粉,Ara h1過敏原蛋白從1μg/mL開始2倍梯度稀釋,共7個(gè)梯度,檢測(cè)抗體的稀釋倍數(shù)為1∶40000,HRP標(biāo)記羊抗鼠二抗1∶10000倍稀釋,37℃顯色20 min,檢測(cè)限為1.38 ng/mL。這兩種雙抗體夾心免疫檢測(cè)方法與14種植物性蛋白均沒有交叉反應(yīng)。
  這兩種夾心ELISA方法的板問變異為2.02%-12.00%、板內(nèi)變異為0.68%-

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