普萘洛爾凝膠治療裸鼠血管瘤的實驗研究.pdf

1、目的：
　　通過培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞，建立血管瘤小鼠模型,給予普萘洛爾凝膠外涂干預(yù)，探討普萘洛爾凝膠抑制血管瘤生長的有效性，為普萘洛爾凝膠治療嬰幼兒血管瘤提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　手術(shù)切取增殖期草莓狀嬰幼兒血管瘤新鮮組織標(biāo)本，用原代組織塊培養(yǎng)法結(jié)合酶消化法培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞，細(xì)胞免疫組化鑒定血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞C D31、C D34、第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原的表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞CD31抗原表達(dá)情況，進(jìn)一步驗證

2、血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞純度；將培養(yǎng)的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞制成細(xì)胞懸浮液使其密度為1×107/個/ml，同基質(zhì)膠3：2混合成500μl注射于Balb c/nu nu裸鼠皮下，注射后第3、5天分別追加注射一次1×107/個/ml,200μl細(xì)胞懸浮液；共20只，對照組和實驗組，每組10只，另有正常裸鼠10只，實驗組于注射后第15天，正常組于等同時間，給予3％普萘洛爾凝膠外涂注射部位，3次/d，對照組不進(jìn)行任何處理；定期記錄、觀察瘤體的生長情況，比較兩組間

3、瘤體的生長差別，觀察涂藥部位裸鼠皮膚有無潰爛、出血、破損，對比兩組裸鼠體重變化，分別于細(xì)胞注射第45d處死各組裸鼠，取血以高效液相色譜熒光檢測法血藥濃度，切取瘤體組織行 HE染色和免疫組化，比較兩組之間組織病理差別。
　　結(jié)果：
　　1.原代組織塊培養(yǎng)第3d，內(nèi)皮細(xì)胞放射游離出組織塊，第16d鋪滿瓶底；
　　2．培養(yǎng)的細(xì)胞CD31、CD34、第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原呈陽性表達(dá)；
　　3．流失細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的純度為99

4、.47%；
　　4.實驗組瘤體生長緩慢，30d左右瘤體消失，涂藥部位皮膚無出血、破潰、破損；
　　5.對照組細(xì)胞注射后第15d瘤體緩慢增大，45d左右瘤體達(dá)最大；
　　6．瘤體組織經(jīng)HE染色后可見有大量的血管生成，免疫組化證實為人體來源的血管瘤。
　　結(jié)論：
　　1.可成功培養(yǎng)出血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞；
　　2.血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞同基質(zhì)膠混合可成功建立裸鼠血管瘤模型；
　　3.普萘洛爾凝膠抑制血管瘤的生長；