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文檔簡介
1、目的:
通過培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞,建立血管瘤小鼠模型,給予普萘洛爾凝膠外涂干預(yù),探討普萘洛爾凝膠抑制血管瘤生長的有效性,為普萘洛爾凝膠治療嬰幼兒血管瘤提供理論依據(jù)。
方法:
手術(shù)切取增殖期草莓狀嬰幼兒血管瘤新鮮組織標(biāo)本,用原代組織塊培養(yǎng)法結(jié)合酶消化法培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞,細(xì)胞免疫組化鑒定血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞C D31、C D34、第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原的表達(dá),流式細(xì)胞儀檢測血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞CD31抗原表達(dá)情況,進(jìn)一步驗證
2、血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞純度;將培養(yǎng)的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞制成細(xì)胞懸浮液使其密度為1×107/個/ml,同基質(zhì)膠3:2混合成500μl注射于Balb c/nu nu裸鼠皮下,注射后第3、5天分別追加注射一次1×107/個/ml,200μl細(xì)胞懸浮液;共20只,對照組和實驗組,每組10只,另有正常裸鼠10只,實驗組于注射后第15天,正常組于等同時間,給予3%普萘洛爾凝膠外涂注射部位,3次/d,對照組不進(jìn)行任何處理;定期記錄、觀察瘤體的生長情況,比較兩組間
3、瘤體的生長差別,觀察涂藥部位裸鼠皮膚有無潰爛、出血、破損,對比兩組裸鼠體重變化,分別于細(xì)胞注射第45d處死各組裸鼠,取血以高效液相色譜熒光檢測法血藥濃度,切取瘤體組織行 HE染色和免疫組化,比較兩組之間組織病理差別。
結(jié)果:
1.原代組織塊培養(yǎng)第3d,內(nèi)皮細(xì)胞放射游離出組織塊,第16d鋪滿瓶底;
2.培養(yǎng)的細(xì)胞CD31、CD34、第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原呈陽性表達(dá);
3.流失細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的純度為99
4、.47%;
4.實驗組瘤體生長緩慢,30d左右瘤體消失,涂藥部位皮膚無出血、破潰、破損;
5.對照組細(xì)胞注射后第15d瘤體緩慢增大,45d左右瘤體達(dá)最大;
6.瘤體組織經(jīng)HE染色后可見有大量的血管生成,免疫組化證實為人體來源的血管瘤。
結(jié)論:
1.可成功培養(yǎng)出血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞;
2.血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞同基質(zhì)膠混合可成功建立裸鼠血管瘤模型;
3.普萘洛爾凝膠抑制血管瘤的生長;
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