FYF基因的克隆及轉化桂花和大巖桐.pdf

1、花的衰老是由外界環(huán)境因素和內部衰老因子共同作用的結果，而乙烯是目前研究得最深入的內部衰老因子之一，也是對花衰老作用最大的一種內源激素?；ò甑乃ダ鲜怯梢蚁┑纳锖铣珊托盘栟D導復雜調控的結果,在花發(fā)育和衰老過程中可以通過阻斷乙烯生物合成或信號轉導某一環(huán)節(jié)來推遲花瓣衰老。目前有研究表明MADS-box基因AGL42也叫FOREVER YOUNG FLOWER(FYF)基因能夠有效抑制乙烯反應下游基因的表達，使轉基因植株對乙烯不敏感，從而達到延

2、遲花衰老的目的。為了進一步探討FYF基因在花衰老過程中的功能，本研究從擬南芥中克隆到FYF基因，構建了其植物表達載體，并轉化幾個桂花品種和大巖桐。
　　本研究主要內容包括：⑴優(yōu)化了桂花的再生體系。不同濃度玉米素誘導大花金桂子葉切塊愈傷組織分化芽的影響結果表明：玉米素濃度為2.0mg·L-1培養(yǎng)基上分化出芽，0.5 mg·L-1的玉米素培養(yǎng)基上分化出根，隨著培養(yǎng)時間的加長發(fā)現(xiàn)玉米素濃度越高的培養(yǎng)基上愈傷組織褐化率越大，最適誘芽培養(yǎng)基

3、為1/2MS+2.0mg·L-1ZT+0.25 mg·L-1 TDZ；同時還研究了不同激素條件對幾個品種離體培養(yǎng)的桂花幼胚存活率、出芽率、幼苗平均株高以及平均叢生芽數(shù)等的影響。實驗結果表明：籽銀桂幼胚在1/2 MS+0.5mg·L-1TDZ+0.1 mg·L-1NAA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，幼胚存活率為100％、萌芽率為50%、幼苗平均株高為3.9cm，叢生芽數(shù)達3個。蓮子丹桂幼胚存活率高達100%，其幼苗平均高度為2.2cm?！皬]州黃”籽銀桂平

4、均叢生芽數(shù)多達3個。⑵克隆了擬南芥FYF基因并構建植物超表達載體。以擬南芥花芽cDNA為模板，擴增得到FYF基因，利用BamH I和Pst I酶切位點，將FYF目的片段與質粒 pCAMBIA13011連接，構建植物超表達載體pCAMBIA13011-FYF，將構建好的表達載體轉化根癌農(nóng)桿菌GV3101。⑶用含有FYF基因的農(nóng)桿菌GV3101侵染幾個桂花品種的愈傷組織，經(jīng)過半個月的延遲篩選培養(yǎng)和半年的篩選培養(yǎng)最終得到Kan抗性愈傷組織，經(jīng)