小擬南芥ApCBF基因的克隆及（擬南芥CBF基因）轉化煙草的研究.pdf

1、自然界的植物經常會遭受干旱、鹽堿和低溫等惡劣環(huán)境的脅迫危害，使植物缺水受到傷害，生長發(fā)育受到抑制，給作物生產帶來嚴重的質量和產量的下降。這些非生物脅迫造成的危害已經成為農業(yè)增產、生態(tài)環(huán)境改良、實現可持續(xù)發(fā)展的重要限制因素。因此，闡明植物對環(huán)境脅迫信號的應答機制，應用基因工程手段提高植物的抗逆性，已成為未來農業(yè)發(fā)展的關鍵和基礎性工作。CBF通過與CRT/DRE(C-repeat/dehydrationresponsiveelement)順

2、式作用元件的結合激活低溫和脫水響應基因的表達，提高植物的抗逆性。因此，CBF類轉錄因子能夠綜合改良植物的抗逆性狀，是迄今為止較為理想的抗逆工程基因之一。 本研究首次利用PCR和chromosomewalking的方法從小擬南芥中得到ApCBF基因的全長，并已將該序列提交Genebank，登錄號為：DQ207404。 本研究選用了CaMV35S組成型啟動子和人工合成的由水楊酸誘導的啟動子SAR、擬南芥CBFs家族中的CBF

3、1和CBF3、新疆小擬南芥COR15a基因及其CRT/DRE順式作用元件構建了不同組合的六個植物表達載體：pCB111、pCB111-1、pCB112、pCB112-1、pCB113和pCB113-1，并采用農桿菌介導的葉盤轉化法轉化煙草，獲得了大量的抗性植株。對抗性植株進行PCR分析，結果為44-88％抗性植株呈陽性。選取其中7株表型明顯、生長良好PCR檢測為陽性的轉基因煙草植株進行southern-blot分析，結果表明所有待檢樣品

4、均出現較強的特異雜交信號，說明目的基因已經整合到轉基因煙草植株的基因組中。對southem-blot檢測為陽性的轉基因植株，提取RNA進行半定量RT-PCR分析，結果發(fā)現CBF1基因在大部分轉基因植株中得到了轉錄水平的表達。 本研究不僅為進一步研究CBF1、CBF3、ApCOR15a以及人工合成的由水楊酸誘導的啟動子SAR的功能奠定了理論基礎。而且為研究和開發(fā)利用通過向植物中導入抗寒基因來提高植物的抗寒性提供了一條新途徑，具有一