柴樸湯對(duì)支氣管哮喘豚鼠嗜酸性粒細(xì)胞凋亡及調(diào)控基因Fas,Fas-L,Bcl-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)建立支氣管哮喘豚鼠模型，觀察中藥柴樸湯對(duì)哮喘豚鼠支氣管肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞凋亡及調(diào)控基因Fas,Fas-L,Bcl-2表達(dá)的影響，探討柴樸湯促進(jìn)支氣管哮喘嗜酸性粒細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制。
　　方法：健康雄性英國(guó)短毛種豚鼠40只，按隨機(jī)數(shù)字表法，將實(shí)驗(yàn)豚鼠隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組，哮喘模型組，地塞米松組，柴樸湯組，每組10只。采用卵蛋白（OVA）致敏和反復(fù)激發(fā)復(fù)制豚鼠的哮喘模型。末次霧化吸入后，針對(duì)各組豚鼠的癥狀表現(xiàn)進(jìn)行行為體

2、征評(píng)分；檢測(cè)各組豚鼠血液中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)及支氣管肺泡灌洗液中白細(xì)胞數(shù)，嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，嗜酸性粒細(xì)胞比例；蘇木素-伊紅染色法觀察各組豚鼠支氣管肺組織病理改變；TUNEL法檢測(cè)各組豚鼠支氣管肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞凋亡；免疫組化、Western Blot檢測(cè)各組豚鼠支氣管肺組織中Fas,Fas-L,Bcl-2蛋白表達(dá)；原位雜交、RT-PCR檢測(cè)各組豚鼠支氣管肺組織中Fas,Fas-L,Bcl-2 mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴各組豚鼠支氣管

3、哮喘癥狀評(píng)分與哮喘模型組比較，地塞米松組、柴樸湯組兩組豚鼠哮喘癥狀明顯改善，哮喘癥狀積分明顯降低（P﹤0.05）。⑵各組豚鼠外周血中嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)與正常對(duì)照組比較，哮喘模型組外周血中嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增高，差異顯著（P＜0.01）；與哮喘模型組比較，地塞米松組、柴樸湯組外周血中嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯降低（P＜0.05）；地塞米松組、柴樸湯組兩組比較，無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。⑶各組豚鼠BALF中白細(xì)胞計(jì)數(shù)，嗜酸性粒細(xì)胞比例，嗜酸性

4、粒細(xì)胞計(jì)數(shù)哮喘模型組 BALF中白細(xì)胞數(shù)，嗜酸性粒細(xì)胞比例，嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，均高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；地塞米松組、柴樸湯組兩組，BALF中白細(xì)胞數(shù)，嗜酸性粒細(xì)胞比例，嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)均低于哮喘模型組（P＜0.05），但高于正常對(duì)照組（P＜0.05）。⑷各組豚鼠支氣管肺組織病理改變正常對(duì)照組支氣管肺組織結(jié)構(gòu)正常完整，管腔光滑，氣道黏膜無(wú)水腫，上皮細(xì)胞未見(jiàn)明顯增生，偶見(jiàn)嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡間隔完整正常。哮喘模型組支氣

5、管管腔狹窄變形，可見(jiàn)黏膜明顯水腫，上皮細(xì)胞大量增生、脫落，黏液分泌明顯增多，支氣管平滑肌增生肥厚，支氣管黏膜層與血管周?chē)允人嵝粤＜?xì)胞為主的大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡間隔變厚，結(jié)構(gòu)紊亂。地塞米松組、柴樸湯組兩組支氣管肺組織病理改變明顯輕于哮喘模型組。⑸TUNEL法檢測(cè)各組豚鼠支氣管肺組織中EOS凋亡與正常對(duì)照組比較，哮喘模型組支氣管肺組織中存在大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，嗜酸性粒細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著降低（P＜0.01）；與哮喘模型組比較，地塞米松組、

6、柴樸湯組凋亡的嗜酸性粒細(xì)胞明顯增加，凋亡指數(shù)顯著增高（P＜0.01）；地塞米松組與柴樸湯組相比較，無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。⑹各組豚鼠支氣管肺組織中 Fas、Fas-L、Bcl-2蛋白表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示地塞米松組、柴樸湯組 Fas、Fas-L蛋白表達(dá)均較哮喘模型組明顯增加（P＜0.05）；與正常對(duì)照組比較，哮喘模型組豚鼠支氣管肺組織Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)顯著增加（P＜0.01），地塞米松組、柴樸湯組，均較模型組明顯降低（P＜0

7、.05）。Western Blot結(jié)果顯示地塞米松組、柴樸湯組均較哮喘模型組支氣管肺組織 Fas、Fas-L蛋白表達(dá)顯著增加（P＜0.01）；與正常對(duì)照組比較，哮喘模型組豚鼠支氣管肺組織 Bcl-2蛋白表達(dá)顯著增加（P＜0.01），地塞米松組、柴樸湯組，均較模型組明顯降低（P＜0.05）。地塞米松組與柴樸湯組相比較，無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。⑺各組豚鼠支氣管肺組織中Fas、Fas-L、Bcl-2 mRNA表達(dá)原位雜交結(jié)果顯示與哮

8、喘模型組比較，地塞米松組、柴樸湯組支氣管肺組織中 Fas、Fas-L mRNA陽(yáng)性表達(dá)明顯增加(P＜0.05)；哮喘模型組豚鼠支氣管肺組織 Bcl-2 mRNA陽(yáng)性表達(dá)較正常對(duì)照組顯著增加（P＜0.01）；地塞米松組、柴樸湯組，均較模型組明顯降低（P＜0.05）。RT-PCR結(jié)果顯示：地塞米松組、柴樸湯組支氣管肺組織中Fas、Fas-L mRNA表達(dá)較哮喘模型組顯著增加（P＜0.01），較正常對(duì)照組亦明顯增加（P＜0.05）；與正常對(duì)照

9、組比較，哮喘模型組豚鼠支氣管肺組織 Bcl-2 mRNA表達(dá)顯著增加（P＜0.01）；地塞米松組、柴樸湯組，均較模型組明顯降低（P＜0.05）。地塞米松組與柴樸湯組相比較，無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：①柴樸湯可以明顯降低哮喘豚鼠外周血和支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，減輕支氣管肺組織的炎癥反應(yīng)。②柴樸湯可以促進(jìn)哮喘豚鼠支氣管肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞凋亡。③柴樸湯可以促進(jìn)哮喘豚鼠支氣管肺組織中Fas，F(xiàn)as-L mR