Scinderin對胃癌細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、研究目的：
　　胃癌是一種常見的消化道惡性腫瘤。腫瘤的復發(fā)和轉(zhuǎn)移是導致進展期胃癌預后差的根本原因。近年來發(fā)現(xiàn),上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，已成為研究腫瘤轉(zhuǎn)移的重要分子機制。目前雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)眾多與胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因，但由于腫瘤轉(zhuǎn)移是多基因參與的復雜過程，對于其機制仍不清楚。因而，尋找新的影響胃癌轉(zhuǎn)移的分子,對于胃癌轉(zhuǎn)移和復發(fā)的診斷、治療和預防具有非

2、常重要的意義。Scinderin是一種依賴 Ca2+的肌動蛋白絲(F-actin)切割蛋白,在細胞分泌過程中發(fā)揮著重要作用。但目前,針對scinderin在人類疾病尤其是腫瘤中的生物學功能研究報道的并不多。本研究擬揭示沉默scinderin對高轉(zhuǎn)移型的人胃癌細胞株SGC-7901的遷移能力、EMT進程、增殖能力以及細胞周期的影響。
　　研究方法：
　　1.構(gòu)建scinderin-shRNA慢病毒載體并感染人胃癌細胞株SGC-

3、7901,于熒光顯微鏡下觀測感染效率,利用RT-qPCR和Western blot實驗檢驗scinderin的沉默效果，從而建立scinderin低表達的穩(wěn)定胃癌細胞株SGC-7901。
　　2.運用Transwell遷移實驗檢測沉默scinderin對SGC-7901細胞遷移能力的影響。
　　3.運用RT-qPCR方法和Western Blot方法檢測分析沉默scinderin對SGC-7901細胞的E-cadherin和

4、N-cadherin等EMT標志分子表達的影響。
　　4.運用實時細胞分析儀(RTCA)和流式細胞術(shù)分別檢測分析沉默 scinderin對SGC-7901細胞增殖能力和細胞周期的影響。
　　結(jié)果：
　　1.scinderin-shRNA慢病毒載體成功感染胃癌細胞株 SGC-7901，并使細胞內(nèi)scinderin的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平受到不同程度的抑制(P<0.01)。由此證實，成功建立了scinderin沉默的穩(wěn)定

5、胃癌細胞株SGC-7901。
　　2. Transwell遷移實驗結(jié)果顯示，scinderin沉默的SGC-7901細胞的遷移能力明顯降低(P<0.05)。
　　3. RT-qPCR和 Western Blot實驗結(jié)果顯示，scinderin沉默的SGC-7901細胞內(nèi)E-cadherin表達水平顯著升高(P<0.001)，而N-cadherin的表達水平顯著降低(P<0.001)。此外還發(fā)現(xiàn)，scinderin沉默的SGC

6、-7901細胞內(nèi)β-catenin蛋白質(zhì)表達水平明顯降低(P<0.01)。
　　4. RTCA增殖實驗結(jié)果顯示，scinderin沉默的SGC-7901細胞的增殖能力明顯降低(P<0.05)；流式細胞術(shù)檢測細胞周期實驗結(jié)果顯示，scinderin沉默的SGC-7901細胞的細胞周期阻滯在G2/M期。
　　結(jié)論：
　　1.沉默scinderin可削弱高轉(zhuǎn)移型胃癌細胞株SGC-7901的EMT進程，有效阻抑癌細胞的遷移能力