GABA-A受體在丙泊酚辨別刺激效應(yīng)中的作用機制.pdf

1、目的:
　　 本課題在前期實驗的基礎(chǔ)上，建立丙泊酚藥物辨別模型，進一步明確丙泊酚的主觀效應(yīng)和精神依賴性，并利用不同GABA-A受體活性藥物進行替代實驗，以明確丙泊酚產(chǎn)生辨別效應(yīng)的藥理學(xué)機制，為今后戒毒研究和職業(yè)防護提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 14周齡雄性SD大鼠，利用固定比率(fixed ratio，F(xiàn)R)食物強化程序以大鼠每天接受30min訓(xùn)練或得到100次食物強化為1個實驗期。訓(xùn)練期間，雙側(cè)鼻觸均有效

2、。訓(xùn)練開始時先以FR1強化程序進行訓(xùn)練，訓(xùn)練期間籠燈打開，大鼠碰觸任一鼻觸探頭（左/右）一次就能得到1顆蔗糖顆粒，同時該鼻觸燈亮，持續(xù)3s后自動熄滅。若大鼠連續(xù)2d在30min內(nèi)得到100次食物強化，則FR值增加1次(FR2)，即連續(xù)碰觸鼻觸探頭兩次得到一次食物強化，然后按照同樣方法訓(xùn)練，直至FR10完成。FR10訓(xùn)練期間，大鼠連續(xù)碰觸左或右鼻觸10次才能得到一次食物獎賞，若連續(xù)2天能夠在30min內(nèi)得到100次強化，則食物訓(xùn)練訓(xùn)練完成

3、，改為丙泊酚辨別訓(xùn)練。
　　 模型穩(wěn)定的大鼠采用(DD，VV，DD，…)順序交替訓(xùn)練，即前2d腹腔注射丙泊酚(D，10mg/kg，i.p.)，以FR1程序進行辨別訓(xùn)練，隨后2d給予等容積的脂肪乳劑(V，20％ intraipid，i.p.)作為溶劑對照進行訓(xùn)練，每一天為一個訓(xùn)練期，每4d為一個訓(xùn)練周期。訓(xùn)練前20min大鼠腹腔給予丙泊酚(10mg/kg)或等量脂肪乳劑，此時將訓(xùn)練籠鼻觸探頭設(shè)為右鼻觸為丙泊酚鼻觸，左側(cè)為溶劑鼻觸，

4、當(dāng)進行丙泊酚辨別訓(xùn)練時，右側(cè)丙泊酚鼻觸即為有效鼻觸，左側(cè)溶劑鼻觸為無效鼻觸。相反，當(dāng)進行溶劑對照訓(xùn)練時，左側(cè)溶劑鼻觸即為有效鼻觸，對側(cè)則為無效鼻觸。辨別訓(xùn)練同樣是從FR1強化程序開始遞增，F(xiàn)R1訓(xùn)練期間，有效鼻觸響應(yīng)一次即可得到一顆蔗糖顆粒強化，無效鼻觸響應(yīng)一次則只記錄數(shù)據(jù)而沒有蔗糖強化，所有數(shù)據(jù)均由計算機程序自動記錄。當(dāng)大鼠鼻觸反應(yīng)正確率連續(xù)兩次達到80％以上時視為合格，即丙泊酚/溶劑組辨別訓(xùn)練期間右/左側(cè)鼻觸次數(shù)與左右側(cè)鼻觸總次數(shù)比

5、值≥80％，此時將FR增加1次繼續(xù)訓(xùn)練，符合辨別穩(wěn)定標(biāo)準(zhǔn)后依次遞增至FR10。
　　 丙泊酚辨別成功的大鼠恢復(fù)辨別訓(xùn)練一個實驗周期后，隨機分成3組(n=6)，分別給予不同劑量的丙泊酚(5.0，7.5，15.0 mg/kg i.p.)進行替代實驗，實驗方法同10mg/kg丙泊酚然后辨別實驗?；謴?fù)訓(xùn)練達到辨別標(biāo)準(zhǔn)后再依次給予不同GABA-A受體激動劑如GABA-A受體α1亞型（α1 GABA-A受體）激動劑 CL-218，872(1

6、.0mg/kg，2.0mg/kg，3.0mg/kg，測試前30min，i.p.)，α2/3/5GABA-A受體激動劑L-838，417(0.2mg/kg，0.4 mg/kg，0.6 mg/kg i.v.，測試前5min)，α2/3 GABA-A受體激動劑SL651，498(0.3mg/kg，1.0mg/kg，3.0mg/kg測試前30min，i.p.)進行丙泊酚樣辨別效應(yīng)替代實驗。所有數(shù)據(jù)記錄均有計算機自動完成。在替代實驗期間，兩側(cè)鼻觸

7、均設(shè)定為有效鼻觸。
　　 大鼠恢復(fù)一個實驗周期的丙泊酚辨別訓(xùn)練，隨機分成3組(n=6)，腹腔注射10mg/kg丙泊酚15min后分別給予α1GABA-A受體拮抗劑β-CCt和α5GABA-A受體反向激動劑L655，708，5min后放入操作籠，觀察兩種藥物對10mg/kg丙泊酚辨別效應(yīng)的阻斷作用。
　　 結(jié)果:
　　 1.10mg/kg丙泊酚能夠形成穩(wěn)定的大鼠藥物辨別行為，在一定范圍內(nèi)丙泊酚辨別刺激效應(yīng)與劑量呈正

8、比。
　　 2.替代實驗，α1受體激動劑能夠產(chǎn)生部分替代(20-80％);α2/3/5受體激動劑產(chǎn)生完全替代(＞80％);α2/3受體激動劑能夠產(chǎn)生部分替代效應(yīng)（20％-80％）。
　　 3.拮抗實驗，α1受體拮抗劑不能明顯降低訓(xùn)練劑量丙泊酚的辨別效應(yīng)(P＞0.05)，而α5反向激動劑組丙泊酚辨別效應(yīng)明顯被抑制(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.通過藥物辨別訓(xùn)練能夠建立大鼠丙泊酚依賴模型