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文檔簡介
1、【目的】探討動態(tài)壓應(yīng)力與共培養(yǎng)微環(huán)境條件對大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)增殖及向髓核樣細(xì)胞分化的影響。
【方法】取原代SD大鼠ADSCs體外培養(yǎng)并擴(kuò)增,流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表面標(biāo)志物后,以第三代ADSCs經(jīng)可控細(xì)胞動態(tài)壓應(yīng)力加載裝置(90mmHg,12h/d)行刺激,并設(shè)置陰性組,采用CFSE染色法測細(xì)胞增殖活性,分別于染色后24h,48h,72h,96h以倒置熒光顯微鏡觀察并以流式細(xì)胞儀檢測熒光衰減度。同時(shí)將包裹有SD大鼠
2、髓核細(xì)胞(NPCs)的藻酸鹽微球與第三代ADSCs混合共培養(yǎng),按細(xì)胞共培養(yǎng)和壓應(yīng)力刺激與否分為單純ADSCs培養(yǎng)組、ADSCs加壓組、單純NPCs培養(yǎng)組、NPCs加壓組、共培養(yǎng)組和共培養(yǎng)聯(lián)合壓力組,于干預(yù)至第7d時(shí)采用RealtimePCR和WesternBlot檢測各組貼壁細(xì)胞SOX-9,Ⅱ型膠原及aggrecan的表達(dá)差異。
【結(jié)果】實(shí)驗(yàn)所用ADSCs經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定顯示CD29、CD44陽性率分別為99.72％、99.5
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