慢性粒細(xì)胞白血病患者Th22-Th17-Th1變化的臨床研究.pdf

1、慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)是獲得性造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病。占成人白血病的15％。發(fā)病機(jī)制是Ph染色體t(9∶22)(q34∶q11)的存在，由于Ph染色體易位形成BCR/ABL融合基因，該基因編碼的P210蛋白具有酪氨酸激酶活性，造成粒細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和過(guò)度增殖[1]。BCR-ABL基因被認(rèn)為是CML的發(fā)病機(jī)制的分子基礎(chǔ)以及診斷和預(yù)后的有效指標(biāo)[2]。慢性粒細(xì)胞白血病患者應(yīng)用ABL酪氨酸激酶

2、抑制劑(TKI)疾病很容易得到控制，但是接受這種治療的患者中大約三分之一的患者會(huì)出現(xiàn)疾病進(jìn)展，這可能與BCR-ABL基因突變及相關(guān)耐藥性有關(guān)[3-4]。基因和免疫因素被認(rèn)為在CML的發(fā)展中起到重要作用。T細(xì)胞免疫缺陷在腫瘤的進(jìn)展中亦起重要作用，近年來(lái)免疫因素在CML中的作用受到越來(lái)越多的關(guān)注。免疫狀態(tài)在CML是非常復(fù)雜和不明確的，因此了解慢性粒細(xì)胞白血病患者的免疫狀態(tài)，對(duì)進(jìn)一步制定以免疫治療為基礎(chǔ)的、有效的治療方案具有重要意義。已有研究

3、表明T細(xì)胞數(shù)量異常，CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞兩個(gè)T細(xì)胞亞群水平的上調(diào)或下調(diào)，與機(jī)體的免疫功能紊亂和某些血液系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5]。然而異常的Th亞群和相關(guān)的細(xì)胞因子在CML的發(fā)生發(fā)展中的作用，目前研究報(bào)道尚少見。
　　多年來(lái)人們對(duì)CD4+T輔助(Th)細(xì)胞的異質(zhì)性的研究局限于Th1和Th2細(xì)胞。研究顯示這兩種細(xì)胞介導(dǎo)分泌不同的細(xì)胞因子，具有不同的免疫功能[6-8]。Th1細(xì)胞介導(dǎo)激活CD8+CTL細(xì)胞，產(chǎn)生致炎性細(xì)

4、胞因子，保護(hù)細(xì)胞抵抗胞內(nèi)微生物，通過(guò)分泌IL-2和IFN-γ促進(jìn)繁殖，從而發(fā)揮抗細(xì)菌、抗病毒和抗腫瘤的作用。此外，IL-2和IFN-γ可以增加NK細(xì)胞的抗腫瘤作用。
　　Th17細(xì)胞和Th22細(xì)胞為近年新近發(fā)現(xiàn)的兩個(gè)Th細(xì)胞亞群，在外周免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用。Th17是一種獨(dú)特的CD4+Th細(xì)胞，其分化與發(fā)育依賴于細(xì)胞因子的作用，Th17細(xì)胞特異性表達(dá)趨化因子受體CCR6及其配體CCL20，分泌IL-17A，IL-17F，IL

5、-21和IL-22[9]。它們對(duì)于細(xì)胞外的病原體，包括細(xì)菌和真菌有重要作用，參與炎癥和自身免疫疾病的發(fā)生。Th17在不同的免疫介導(dǎo)的疾病以及腫瘤的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用[10-11]。Th17細(xì)胞參與腫瘤免疫，但在不同腫瘤的研究中報(bào)道并不一樣，是促進(jìn)還是抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展目前尚無(wú)定論，Th17在腫瘤發(fā)生發(fā)展中所起的作用仍在研究中[12]。IL-17在自身免疫、腫瘤和機(jī)體抗感染免疫中作為Th17細(xì)胞的主要效應(yīng)因子，在多種組織的基質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮

6、重要作用[13]。在骨髓基質(zhì)中，IL-17通過(guò)調(diào)節(jié)結(jié)合性和可溶性細(xì)胞因子的表達(dá)，干預(yù)造血干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖、分化和動(dòng)員[14]。
　　Th22細(xì)胞是最近發(fā)現(xiàn)的一種新型的CD4+輔助T細(xì)胞亞群，其分泌IL-22和TNF-α，而不分泌IL-17和IFN-γ。Th22細(xì)胞表達(dá)趨化因子受體CCR6及皮膚歸巢受體CCR4、CCR10，高度表達(dá)芳香烴受體的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子(AHR)[15-16]。初始性CD4+T細(xì)胞在IL-6和腫瘤壞死因

7、子α(TNF-α)的作用下，可以向Th22的表型方向分化，最終形成Th22細(xì)胞群[17]。Th22細(xì)胞代表一個(gè)獨(dú)立的終末分化的T細(xì)胞亞型[18-19]。
　　IL-22屬于IL-10細(xì)胞因子家族，Th22是主要產(chǎn)生IL-22的T細(xì)胞亞群，Th22細(xì)胞的功能主要通過(guò)IL-22來(lái)實(shí)現(xiàn)[16-17,20]。IL-22在差異誘導(dǎo)幼稚和記憶/效應(yīng)細(xì)胞中發(fā)揮保護(hù)或致病作用[21-22]。IL-22通過(guò)調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞的生物學(xué)活性，在誘導(dǎo)急性炎性介

8、質(zhì)反應(yīng)、抗感染、增強(qiáng)宿主防御復(fù)等方面起重要作用。當(dāng)前研究表明，IL-22參與細(xì)胞生長(zhǎng)，增殖和細(xì)胞周期的調(diào)控[23-25]，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。
　　Th22和Th17細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)為疾病的病因和治療開辟了一個(gè)新的研究途徑。最近的研究報(bào)道了Th17/Th22細(xì)胞及其效應(yīng)細(xì)胞因子IL-17/IL22在一些自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)理和在肝細(xì)胞癌[26]、胃癌[27]和肺癌[28]等腫瘤中的作用。國(guó)內(nèi)外對(duì)Th22及其相關(guān)細(xì)胞因子在

9、腫瘤學(xué)領(lǐng)域的研究剛剛起步，關(guān)于Th22細(xì)胞和IL-22在腫瘤免疫中的作用和在腫瘤微環(huán)境中的分化、分布，目前的研究數(shù)據(jù)尚有限。Th22和Th17細(xì)胞在血液系統(tǒng)惡性腫瘤和非腫瘤性血液病中的作用有了一些研究報(bào)道。到目前為止，尚未有Th22和Th17、Th1細(xì)胞亞群與CML相關(guān)的研究報(bào)道。
　　目的:
　　在本研究中，我們檢測(cè)了CML患者外周血和骨髓中Th22、Th17和Th1細(xì)胞的比例、Th17和Th22細(xì)胞的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子AHR和

10、RORC的表達(dá)水平及Th22、Th17和Th1相關(guān)細(xì)胞因子IL-22、IL-17、IFN-γ的濃度，研究上述T細(xì)胞亞群在CML中的相關(guān)性及其與CML臨床特征的關(guān)系，為進(jìn)一步研究Th22、Th17和Th1細(xì)胞在血液系統(tǒng)腫瘤免疫機(jī)制中的作用提供資料。
　　方法:
　　1.共63例CML患者納入研究，其中初診(ND)31例，TKI(伊馬替尼)治療后緩解的CML慢性期(CML-CP)患者32例;33例正常對(duì)照（22外周血和11例骨髓

11、）。
　　2.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th22/Th17/Th1細(xì)胞在CML患者骨髓和外周血中的比例。
　　3.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)CML患者Th22和Th17相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子AHR和RORC mRNA的表達(dá)水平。
　　4.應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)CML患者骨髓和外周血中的細(xì)胞因子IL-22、IL-17和IFN-γ的濃度。
　　5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

12、　　結(jié)果:
　　1.CML初診患者外周血和骨髓的Th22、Th17和Th1比例明顯低于伊馬替尼治療后疾病緩解的CML-CP和正常對(duì)照組(P＜0.05)。
　　2.Th22和Th17相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子AHR和RORCmRNA的表達(dá)水平:初診的CML患者外周血和骨髓的單個(gè)核細(xì)胞的AHR基因轉(zhuǎn)錄水平與伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者組和正常對(duì)照組比較明顯降低(P＜0.05)。伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者的外周血AHR的水平比

13、正常對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)。伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者骨髓中的AHR的表達(dá)水平比正常對(duì)照組高(P＞0.05)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。初診的CML患者外周血和骨髓的單個(gè)核細(xì)胞的RORC基因轉(zhuǎn)錄水平與伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者組和正常對(duì)照組比較均明顯降低(P＜0.05)。伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者組和正常對(duì)照組的外周血和骨髓的單個(gè)核細(xì)胞的RORC基因轉(zhuǎn)錄水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.初

14、診CML和伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者外周血的IL-17濃度高于正常對(duì)照組(P＜0.05)。CML-CP組外周血的IL-22濃度比正常對(duì)照組升高(P＜0.05)。骨髓中IL-22和IL-17的濃度在初診CML、CML-CP和正常對(duì)照組無(wú)差異。初診CML骨髓的IFN-γ濃度比正常對(duì)照高(P＜0.05)，而CML外周血中IFN-γ的濃度在初診CML、CML-CP和正常對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.CML

15、患者外周血和骨髓的Th22和Th17細(xì)胞水平之間均呈正相關(guān)，而Th1和Th22、Th17細(xì)胞之間無(wú)相關(guān)性。
　　5.Th22、Th17和Th1細(xì)胞的比例與CML患者外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及BCR-ABL％(IS)均呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　初診CML患者體內(nèi)存在Th22、Th17和Th1細(xì)胞數(shù)量減少，CML患者的免疫功能低下可能和Th22，Th17或Th1細(xì)胞數(shù)量的減少有關(guān)。經(jīng)伊馬替尼治療的CML患者，疾病緩解后Th22、