西瓜食酸菌抗銅性相關基因cusB的功能分析.pdf

1、西瓜食酸菌(Acidovorax citrulli)侵染葫蘆科植物會使其產(chǎn)生一種破壞力極大的瓜類細菌性果斑病(bacterial fruit blotch，BFB)，該病害已在世界各國迅速傳播，對當?shù)氐奈魈鸸袭a(chǎn)業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。目前銅素類殺菌劑廣泛應用于防治瓜類細菌性果斑病，但過度使用，使得西瓜食酸菌抗銅能力逐漸增強，因此，研究該病菌的抗銅機理顯得尤為突出。
　　本研究首先對西瓜食酸菌RND（耐藥結(jié)節(jié)細胞分化）家族外排轉(zhuǎn)運體的

2、膜融合蛋白基因cusB進行生物信息學分析，然后利用實驗室保存的cusB基因缺失的突變體△cusB，通過比較野生型和突變體以及功能互補菌株在抗銅性、胞外分泌物檢測、致病性及過敏性壞死反應等相關的生物學性狀之間的差異分析，研究cusB基因的功能，主要獲得以下結(jié)論:
　　首先，cusB基因的生物信息學分析，cusB基因大小為1185bp，編碼具有394個氨基酸殘基的CusB蛋白亞基，主要作為一個轉(zhuǎn)運體參與RND外排轉(zhuǎn)運體的正常工作，西瓜

3、食酸菌的CusB蛋白與大腸桿菌的CusB蛋白在理化性質(zhì)以及親緣關系上較近，預測該蛋白在1-30氨基酸殘基處疏水性較高，且存在一個跨膜結(jié)構(gòu)域，預測發(fā)現(xiàn)存在多個磷酸化位點，分泌蛋白的亞細胞定位于周質(zhì)空間，其二級結(jié)構(gòu)存在α-螺旋、β-折疊、無規(guī)則卷曲。
　　其次，cusB基因缺失突變體與野生型和功能互補菌株表型測定比較本研究利用雙親雜交的方法構(gòu)建功能互補菌株，與野生型相比，突變體在抗銅性，胞外多糖分泌，生物膜形成中顯著降低，而在功能互補