顱骨缺損生物性修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究——骨髄來(lái)源的成骨細(xì)胞復(fù)合異體滅活多孔骨瓣修補(bǔ)顱骨缺損.pdf

1、目的:建立新西蘭大白兔標(biāo)準(zhǔn)顱骨缺損的動(dòng)物模型,利用組織工程方法,在無(wú)外源性生長(zhǎng)因子的作用下,將體外培養(yǎng)擴(kuò)增的自體BM SCs定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后接種于異體滅活多孔顱骨瓣并回植顱骨缺損處以修復(fù)兔子標(biāo)準(zhǔn)顱骨缺損,同時(shí)闡明本實(shí)驗(yàn)的相關(guān)機(jī)制及可行性,為臨床上尋找更好的顏骨缺損生物學(xué)修補(bǔ)方法提供基礎(chǔ)研究。
　　材料及方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為純種新西蘭大白兔50只,雌雄不限,4月齡左右。分兩大組:(I)實(shí)驗(yàn)組(25只),將體外培養(yǎng)擴(kuò)增的自體BM

2、SCs定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后接種于異體滅活多孔顱骨瓣并回植顱骨缺損處,修復(fù)兔子顏骨標(biāo)準(zhǔn)缺損;(2)常規(guī)對(duì)照組(25只),僅異體滅活多孔顱骨瓣回植顱骨缺損處,修復(fù)兔子顱骨標(biāo)準(zhǔn)缺損。兩組于第10、15天對(duì)受區(qū)進(jìn)行成骨細(xì)胞內(nèi)源性BMP-2的免疫組化檢查,另兩組設(shè)2周、4周、8周、12周、16周5個(gè)時(shí)限,于各個(gè)限點(diǎn)處死動(dòng)物取材,對(duì)受區(qū)分別進(jìn)行大體形態(tài)、組織學(xué)、掃描電鏡觀察和最終所形成的骨瓣進(jìn)行骨密度的檢查,每個(gè)限點(diǎn)5只動(dòng)物。
　　結(jié)果:

3、骨髓基質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)、體外擴(kuò)增經(jīng)條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)后,可轉(zhuǎn)化為成骨細(xì)胞,經(jīng)堿性磷酸酶檢測(cè)證實(shí)其為成骨細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組和常規(guī)對(duì)照組共50例,除其中I例術(shù)后移植區(qū)發(fā)生感染和I例不明原因死亡外,其它48例顱骨缺損區(qū)均得到較滿意的修補(bǔ)效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察:1.大體形態(tài):實(shí)驗(yàn)組與常規(guī)對(duì)照組無(wú)明顯差別,16周時(shí)兩組受區(qū)均已基本為新生骨代替,與缺損邊緣形成骨性愈合,界面牢固。2.組織學(xué)及電鏡檢查:實(shí)驗(yàn)組受區(qū)內(nèi)可見有大量成骨細(xì)胞充填于死骨孔隙內(nèi),細(xì)胞增殖并見胞

4、外基質(zhì)分泌,見骨陷窩形成及血管長(zhǎng)入植骨區(qū)。大量骨化中心形成,成骨細(xì)胞被固定在骨基質(zhì)中變?yōu)楣羌?xì)胞,形成小梁狀不成熟的編織骨組織,隨著骨基質(zhì)中礦物質(zhì)和有機(jī)物的增加,骨基質(zhì)日趨成熟,鈣化明顯,從而使層板骨取代編織骨完成顱骨缺損的修補(bǔ)。常規(guī)對(duì)照組受區(qū)內(nèi)的成骨細(xì)胞數(shù)量、成骨活性及血管化均不如實(shí)驗(yàn)組,且時(shí)間上成骨活動(dòng)比實(shí)驗(yàn)組慢4一6周。3.內(nèi)源性BMP-2免疫組織化學(xué)檢查:第10天和第15天的兩次檢測(cè),實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)源性BMP-2免疫組織化學(xué)檢查見胞

5、質(zhì)內(nèi)有深染的棕黃色顆粒,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量和表達(dá)強(qiáng)度均比常規(guī)對(duì)照組強(qiáng)。4.骨密度的測(cè)定:實(shí)驗(yàn)組骨礦含量和骨密度(B M C、BMD)結(jié)果稍低于正常對(duì)照組,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而常規(guī)對(duì)照組骨礦含量和骨密度明顯低于正常對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:1、骨髓可以成為骨組織工程中較常用的種子細(xì)胞來(lái)源。2、異體多孔顱骨瓣經(jīng)高溫滅活后可以成為骨組織工程中較常用的支架來(lái)源。3、自體成骨細(xì)胞復(fù)合異體滅活多孔顱骨瓣修補(bǔ)盧頁(yè)骨缺損主要是以膜