丹黃方對急性肝衰竭大鼠IL-6及c-met影響的實驗研究.pdf

1、目的急性肝衰竭(AcuteLiverFailure，ALF)是一種嚴重危害人類健康、病情復雜兇險臨床綜合征，病變可涉及多個器官，死亡率高達70％～80％。在基礎綜合治療齊同的情況下，加用中藥保護殘存肝細胞和促進肝臟再生，提高存活率，就尤為重要。急性肝衰竭由于征候變化多端，病機錯綜復雜，給臨床辨證論治帶來了諸多困難。但是我們認為，本病癥雖然千變?nèi)f化，其病因病機不外“毒”、“瘀”兩字，毒為致病之因，瘀為病變之本，而毒與瘀又互為因果，因毒雖為

2、致病之因，若毒盛則必導致瘀盛，而瘀盛必定生毒，從而加重肝臟血瘀病變，形成惡性循環(huán)致瘀毒膠結難解的局面。因此我們認為其治療的重要法則是，重在解毒，貴在化瘀。目前對肝衰竭的治療尚缺乏特別有效的藥物，我們據(jù)湖北中醫(yī)院肝病研究中心經(jīng)過多年中草藥研究經(jīng)驗，自擬丹黃方按1：1比例進行試驗研究，采用丹參活性化瘀，減輕中毒性肝損傷和改善肝臟微循環(huán)作用，大黃通里攻下、排毒、抗菌消炎，針對肝衰竭毒盛血瘀的成因合而用之。本實驗通過建立硫代乙酰胺致大鼠急性肝衰

3、竭模型，觀察肝功能、血清IL-6、肝細胞有絲分裂指數(shù)(MI)、c-met蛋白的變化，探討丹黃方對大鼠試驗性急性肝衰竭的影響和可能作用機制，為中醫(yī)藥治療ALF提供科學理論依據(jù)。 方法1.為研究丹黃方對大鼠試驗性急性肝衰竭的影響及可能機制，將大鼠隨機分為正常對照組(A組)、模型對照組(B組)、肝生素組(C組)及丹黃小、中、大劑量組(D、E、F組)。試驗開始至實驗結束，除C組外所有動物每日皮下注射5m1混合液(3ml10％葡萄糖、2m

4、l含適量生理鹽水與20μmol/LKC1)以防低血糖，C組予肝生素2mg/kg溶于防止低血糖的混合液中，每日皮下注射一次，持續(xù)3d。D、E、F組分別給等體積/重量比的相應藥物灌胃(三組給藥劑量之比為1：5：10)，每日一次，持續(xù)3d，為保證給藥途徑的一致性，A、B、C組同時給與等體積/重量比的生理鹽水灌胃。試驗第4d除A組皮下注射同等劑量的生理鹽水外，其余各組予TAA(600mg·kg-1體重，0h、24h皮下注射)造模。48h后取材。

5、 2.觀察造模后48h內(nèi)大鼠病死率，腹主動脈無菌采血，檢測ALT、AST、TB及IL-6。 3.取肝組織制作切片，光鏡及電鏡觀察結構變化。 4.取肝組織普通病理切片常規(guī)染色后，檢測肝細胞有絲分裂指數(shù)(MI)。 5.取肝組織免疫組織化學染色法檢測c-met蛋白。 結果1.丹黃方可以顯著改善ALF大鼠行為異常，提高存活率。 2.B組大鼠ALT、AST、TBil、IL-6水平均明顯高于A組(P＜

6、0.01)，C、D、E、F組上述指標亦高于A組。丹黃方各劑量治療組上述指標較B組均有所下降，其中，以F組下降值最多。且經(jīng)直線回歸相關分析顯示，大鼠血清IL-6水平與ALT、AST、TBiL均呈顯著正相關(P＜0.01)；血清IL-6水平與各組大鼠肝臟壞死程度呈正相關。 3.鏡下觀察，B組大鼠肝細胞有不同程度的變性、壞死，壞死組織中有較多的炎性細胞及脂滴浸潤。與B組相比，C、D、E、F組肝細胞損傷程度和損傷面積均有改善，而以F組改

7、善最明顯。 4.正常組大鼠肝組織MI較低，與B、C組大鼠相比，差異顯著(P＜0.01)。丹黃方治療后，大鼠肝組織MI指數(shù)升高，且隨著丹黃方劑量的增加指數(shù)增加，丹黃中、大劑量組大鼠肝組織MI指數(shù)，與模型組相比，明顯升高(P＜0.01)。 5.正常組大鼠肝組織中，c-met表達水平最低，C組與B組之相比，差異顯著(P＜0.01)。丹黃方治療后，大鼠肝組織c-met指數(shù)介于C組和B組之間，且隨著丹黃方劑量的增加c-met指數(shù)增

8、加。 結論免疫損傷在ALF的發(fā)病機理中占有重要地位，實驗發(fā)現(xiàn)，大鼠急性肝衰竭時，ALT、AST、TBil、IL-6水平顯著升高，且肝損傷程度與IL-6水平升高相一致，提示IL-6參與TAA誘導的肝損害，證實了炎性細胞因子介導的免疫性損傷在ALF中的作用。丹黃方預防用藥后，部分逆轉了TAA所致的肝損害；肝組織形態(tài)學的改變明顯減輕，其作用機制可能是通過調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)來減輕肝損傷程度，促進大鼠肝細胞有絲分裂，從而有效的促進肝細胞的增