小鼠胃癌模型中T淋巴細(xì)胞與NK細(xì)胞的改變.pdf

1、目的：
　　本研究通過建立胃癌小鼠模型，檢測小鼠脾臟中T淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）、自然殺傷（NK）細(xì)胞活化受體NKG2D的表達(dá)水平和NK細(xì)胞的殺傷活性，探討T淋巴細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和NK細(xì)胞活化受體NKG2D在胃癌發(fā)展過程中的變化以及在腫瘤免疫逃逸機(jī)制中的作用。
　　方法：
　　1.通過615小鼠頸背部皮下種植不同濃度的小鼠前胃癌（MFC）細(xì)胞株建立胃癌小鼠模型，建模后經(jīng)病理學(xué)檢驗(yàn)。

2、　　2.建模成功后，小鼠分為胃癌組（n=20）和正常組(n=20)，取小鼠脾細(xì)胞，制成懸液，采用流式細(xì)胞儀檢測小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞及CD4+CD25+Treg的含量；并用RT-PCR法檢測Treg細(xì)胞特異性標(biāo)志物Foxp3 mRNA基因的相對表達(dá)量；
　　3.同法，取小鼠脾細(xì)胞懸液，用流式細(xì)胞儀檢測NK細(xì)胞活化受體NKG2D的表達(dá)水平；脾淋巴細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，Yac-1作為靶細(xì)胞（小鼠NK細(xì)胞的靶細(xì)胞，其細(xì)胞表面無MHC-I類分子表

3、達(dá)），用LDH酶法檢測共培養(yǎng)后NK細(xì)胞的免疫活性。
　　結(jié)果：
　　1.所有小鼠皮下種植MFC細(xì)胞株均可成瘤。
　　2.胃癌組小鼠脾CD3+T、CD8+T較正常組升高有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；CD4+T/CD8+T細(xì)胞比值較正常組降低有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.胃癌組小鼠脾Treg細(xì)胞及其特異性蛋白Foxp3的表達(dá)量較正常組升高，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　4.胃癌組小鼠脾NK細(xì)胞表

4、面活性受體NKG2D的表達(dá)水平及NK細(xì)胞殺傷活性較正常組降低，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.615小鼠皮下種植小鼠前胃癌細(xì)胞能成功建立胃癌小鼠模型。
　　2.在胃癌發(fā)展過程中，胃癌細(xì)胞所引起的細(xì)胞免疫造成T細(xì)胞總數(shù)和CD8+T細(xì)胞水平升高，CD4+T細(xì)胞的比例會降低，從而引起CD4+T/CD8+T細(xì)胞比值降低。
　　3.在胃癌發(fā)展過程中，Treg細(xì)胞水平及其特異性蛋白Foxp3的表達(dá)量升高，