檉柳eIF1A基因的功能驗(yàn)證.pdf

1、1.成功構(gòu)建了eIF1A基因的酵母表達(dá)載體，并進(jìn)一步通過(guò)抗生素篩選、PCR擴(kuò)增和雙酶切檢測(cè)，證實(shí)eIF1A基因已連接到酵母表達(dá)載體pYES2上;將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化釀酒酵母，通過(guò)尿嘧啶缺陷型培養(yǎng)基篩選和PCR檢測(cè)，已經(jīng)確定目的基因eIF1A已經(jīng)成功的整合到了酵母的染色體上;Northern雜交結(jié)果說(shuō)明，該基因不僅整合到了酵母的染色體上，而且也正確表達(dá)。
　　2.對(duì)重組酵母進(jìn)行了脅迫處理實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步表明:eIF1A基因在酵母中的組成

2、型表達(dá)能有效改善酵母在NaCl、Na2CO3、冰凍、熱激逆境下的生長(zhǎng)狀態(tài)，在一定程度上有效的增強(qiáng)了釀酒酵母的耐鹽性。
　　3.成功地制備了eIF1A基因的工程菌液，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將eIF1A基因轉(zhuǎn)入山新楊楊基因組中，獲得卡那抗性植株21余株;對(duì)21個(gè)轉(zhuǎn)化株系進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果15個(gè)轉(zhuǎn)基因株系為陽(yáng)性，說(shuō)明該基因已經(jīng)整合到了山新楊基因組中;對(duì)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行Northern印跡雜交，證實(shí)eIF1A基因在楊樹中能正確表達(dá)。

3、　　4.對(duì)轉(zhuǎn)基因山新楊進(jìn)行1.2Mmol NaCl脅迫實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明:轉(zhuǎn)基因楊樹的耐鹽性明顯高于對(duì)照株系;當(dāng)轉(zhuǎn)基因植株脅迫9天后，5個(gè)轉(zhuǎn)基因株系和對(duì)照株系的SOD、POD和MDA含量變化達(dá)到了差異顯著;其中抓基因株系T10表現(xiàn)最佳，其SOD和POD含量是對(duì)照的1.19199和2.177倍，對(duì)照的MDA含量是轉(zhuǎn)基因株系T10的2.208倍，從而證明eIF1A基因能夠提高山新楊對(duì)鹽脅迫的耐受能力。綜合各個(gè)株系各項(xiàng)生理指標(biāo)的表現(xiàn)，最后確定轉(zhuǎn)基