檉柳bZIP基因的克隆及耐鹽功能研究.pdf

1、從檉柳cDNA文庫(kù)中得到兩條bZIP序列Tab ZIP1和TabZIP2。利用5'RACE方法獲得Tab ZIP1基因的全長(zhǎng)cDNA序列，Tab ZIP1基因cDNA全長(zhǎng)1609bp，其中開放讀碼框(ORF)為1419bp，編碼472個(gè)氨基酸組成的蛋白。預(yù)計(jì)分子量為51.9kD，理論等電點(diǎn)為6.44。檉柳cDNA文庫(kù)中得到另一條bZIP家族全長(zhǎng)序列TabZIP2。該序列全長(zhǎng)為760bp，開放閱讀區(qū)全長(zhǎng)為435bp，共編碼144個(gè)氨基酸預(yù)

2、計(jì)蛋白的分子量為16.5kD，理論等電點(diǎn)為6.60。
　　利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)研究了Tab ZIP1基因在檉柳中對(duì)脅迫處理的表達(dá)。結(jié)果表明，Tab ZIP1基因可以被NaCl脅迫誘導(dǎo)表達(dá)，在脅迫24 hTabZIP1基因在檉柳中表達(dá)量最高，是對(duì)照(0 h)表達(dá)量的8.6倍，在NaHCO3脅迫下，Tab ZIP1基因的表達(dá)都被抑制，表達(dá)量均低于對(duì)照(0 h)。
　　將TabZIP2構(gòu)建到植物表達(dá)載體pROKII中，形成

3、重組質(zhì)粒pBZIP2。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草的遺傳轉(zhuǎn)化，使外源基因整合到煙草基因組中。對(duì)轉(zhuǎn)化植株的PCR檢測(cè)初步證明外源基因已經(jīng)整合到煙草基因組中。
　　選取4個(gè)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行了NaCl脅迫試驗(yàn)，分析逆境脅迫條件下非轉(zhuǎn)基因植株和這些轉(zhuǎn)基因植株的POD活性、SOD活性、丙二醛(MDA)含量、相對(duì)電導(dǎo)率、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、相對(duì)生長(zhǎng)率、相對(duì)含水率等指標(biāo)的變化。結(jié)果顯示，在脅迫4d時(shí)，轉(zhuǎn)基因株系的POD活性、SOD活性、可溶性蛋