2型糖尿病大鼠vWF的動(dòng)態(tài)變化及其意義.pdf

1、目的：近年來(lái)，2型糖尿病的發(fā)病率日益增加，而影響病人預(yù)后的主要因素在于其慢性并發(fā)癥出現(xiàn)的早晚及其嚴(yán)重程度，糖尿病并發(fā)癥的出現(xiàn)與全身大血管及微血管的功能異常密切相關(guān)。隨著對(duì)糖尿病發(fā)病機(jī)制研究的深入，內(nèi)皮細(xì)胞受損在血管并發(fā)癥發(fā)病過(guò)程中所起的作用越來(lái)越受到重視。假性血友病因子(vWF)升高被認(rèn)為是血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的標(biāo)志之一。vWF是一種主要由內(nèi)皮細(xì)胞、巨核細(xì)胞合成和分泌的糖蛋白，一方面，vWF作為凝血Ⅷ因子的載體，延長(zhǎng)了Ⅷ因子的半衰期，有助于

2、保持Ⅷ因子的活性，有助于內(nèi)源途徑生成凝血酶而加強(qiáng)凝血，另一方面vWF作為血小板與損傷內(nèi)皮細(xì)胞黏附的“橋梁”，參與血小板黏附并進(jìn)一步聚集于受損的內(nèi)皮細(xì)胞，啟動(dòng)血栓形成的第一步。 本研究的目的是通過(guò)建立2型糖尿病大鼠模型，檢測(cè)其成模后0、4、8、12、16周的vWF濃度，以了解糖尿病大鼠隨病程進(jìn)展vWF的變化趨勢(shì)，并進(jìn)一步探討糖尿病大鼠vWF濃度變化與血小板活化及血栓形成之間的關(guān)系，為臨床預(yù)防及早期發(fā)現(xiàn)糖尿病患者血栓性并發(fā)癥提供客觀

3、依據(jù)。 方法：健康7周齡清潔級(jí)近交系Wistar大鼠120只(河北醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重180-220g，雌雄各半，隨機(jī)分為兩組：正常組(control group，CON)50只，雌雄各半，作為對(duì)照；實(shí)驗(yàn)組(trial group,TRI)70只，雌雄各半。正常組動(dòng)物喂養(yǎng)普通飼料：蛋白質(zhì)占23％，碳水化合物占50％，脂肪占5％；實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物喂養(yǎng)高脂飼料：在10000g普通飼料中加入150g食鹽、50g白糖、2000g豬

4、油、400g麻油、2000g花生、900g雞蛋，其碳水化合物48％，脂肪22％，蛋白質(zhì)20％。2月后實(shí)驗(yàn)組大鼠腹腔注射30mg/kg鏈脲佐菌素(STZ)(以PH4.4的0.1mol/L檸檬酸鈉緩沖液配制成1％濃度)，正常組大鼠腹腔注射同等量的檸檬酸鈉緩沖液。一周后給所有動(dòng)物做口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(大鼠禁食12h后尾靜脈取血測(cè)空腹血糖，然后按2g/kg體重灌胃50％葡萄糖溶液，2h后尾靜脈取血測(cè)2h血糖)，空腹血糖≥7.0mmol/l，糖負(fù)

5、荷后2小時(shí)血糖≥11.1mmol/l者為造模成功。從造模成功者中選取血糖較高的大鼠50只(雌雄各半)納入正式試驗(yàn)，作為糖尿病組(diabetes group，DIA)。采用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)將正常組和糖尿病組各分為0周、4周、8周、12周、16周5組，每組10只，雌雄各半，分別于以上時(shí)段空腹取血測(cè)定觀測(cè)值。正常組一直喂普通飼料，糖尿病組繼續(xù)喂高脂飼料，以防血糖回落，每2周測(cè)體重和空腹血糖(均為禁食10-12小時(shí)，尾靜脈取血)，空腹血糖<7.

6、0mmol/l為剔除條件。于試驗(yàn)第0、4、8、12、16周末，大鼠禁食10-12小時(shí)后，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，下腔靜脈取血5-10ml注入EDTA抗凝試管內(nèi)，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液，-80℃冰箱保存。待標(biāo)本收集齊全后同批測(cè)定。vWF濃度(ELASA法)。另同時(shí)取大鼠尿液約1ml及尾靜脈血10μ1，使用DCA2000+測(cè)定尿微量白蛋白及HbA1c。 所用數(shù)據(jù)輸入SAS統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表

7、示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析和Q檢驗(yàn)，兩者之間相關(guān)性關(guān)系采用直線相關(guān)分析。P<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異。 結(jié)果： 1.成模前正常組大鼠隨年齡增長(zhǎng)，體重穩(wěn)定增加，血糖值均在正常范圍；試驗(yàn)組大鼠體重增長(zhǎng)較正常組快，但血糖值亦在正常范圍。 2.正常組大鼠隨年齡增長(zhǎng)，體重增加，血糖值穩(wěn)定，均在正常范圍，各時(shí)間段之間無(wú)明顯差別。糖尿病組大鼠隨著病情的進(jìn)展血糖值處于較高水平，無(wú)明顯增高或降低，各

8、時(shí)間段之間無(wú)明顯差別(P>0.05)；糖尿病組大鼠成模后體重增加，與正常組同時(shí)段比無(wú)明顯差異。 3.正常組大鼠各時(shí)間段vWF濃度無(wú)明顯變化；糖尿病組大鼠在成模0周時(shí)vWF水平已有升高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，由4周開(kāi)始vWF水平相對(duì)于對(duì)照組明顯升高(P<0.05)，各時(shí)間段相比隨病程延長(zhǎng)濃度逐漸增高，8周開(kāi)始較前一時(shí)間段差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。糖尿病組大鼠HbA1c與vWF濃度呈正相關(guān)(r=0.712)(p<0.01)；vWF濃度與尿微量