ST6Gal-Ⅰ通過上調(diào)整合素β1的唾液酸化促進(jìn)絨毛膜癌細(xì)胞的遷移.pdf

1、絨毛膜癌是一種高度惡性的發(fā)生于胎盤外層絨毛膜上皮細(xì)胞（即滋養(yǎng)葉細(xì)胞）的腫瘤，具有較強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力。近年來對轉(zhuǎn)移性腫瘤的研究逐漸聚焦于蛋白質(zhì)翻譯后修飾（如糖基化、磷酸化、硫酸化等），特別是蛋白質(zhì)的糖基化修飾，這種修飾的復(fù)雜多變性與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移強(qiáng)弱是否有關(guān)備受關(guān)注。糖蛋白分子中不同的糖殘基是由細(xì)胞中催化糖殘基生成的各種糖基轉(zhuǎn)移酶和催化糖殘基降解的糖苷酶的活性來決定的，其中β-半乳糖α2,6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶1(ST6Gal-Ⅰ)可催化活化的唾

2、液酸以α-2，6糖苷鍵的形式連接到細(xì)胞膜表面糖蛋白的N-乙酰半乳糖胺上。ST6Gal-Ⅰ的底物蛋白的α2，6唾液酸化會影響其自身結(jié)構(gòu)及活性的變化，并參與細(xì)胞的遷移、粘附、增殖、凋亡等多種生物學(xué)活動。已有研究表明，ST6Gal-Ⅰ與多種腫瘤（如膠質(zhì)瘤，卵巢癌，直腸癌等）的高轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)。因此，探討腫瘤細(xì)胞膜上功能蛋白糖基化對腫瘤轉(zhuǎn)移活性影響的分子機(jī)制，對于揭示臨床上腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)理、尋找新的分子標(biāo)記物有著重要的意義。
　　本研究以

3、人絨毛膜癌細(xì)胞系JAR和正常絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞HTR-8/Svneo為研究對象，采用熒光定量PCR、western blot、siRNA干擾、transwell等方法，檢測分析兩種細(xì)胞中ST6Gal-Ⅰ及其α2，6唾液酸化總蛋白的表達(dá)情況，初步探討了ST6Gal-Ⅰ對JAR細(xì)胞遷移能力的影響及其作用機(jī)制。所得研究結(jié)果如下:
　　1.兩種細(xì)胞的生長形態(tài)差異明顯，HTR-8/SVneo主要呈梭形均勻分布生長舒展，而JAR細(xì)胞主要呈多邊形成

4、團(tuán)生長且多突觸。
　　2.Transwell小室實(shí)驗(yàn)顯示JAR細(xì)胞的遷移能力明顯強(qiáng)于HTR-8/SVneo細(xì)胞。
　　3.PCR、Western Blot和Lectin Blot方法檢測表明JAR細(xì)胞的ST6Gal-Ⅰ mRNA和蛋白表達(dá)以及α2，6唾液酸化總蛋白水平均高于HTR-8/Svneo細(xì)胞，與其遷移能力呈正相關(guān)。
　　4.siRNA干擾JAR細(xì)胞的ST6Gal-Ⅰ后細(xì)胞的遷移能力明顯下降。經(jīng)免疫共沉淀技術(shù)檢測

5、發(fā)現(xiàn)siRNA干擾組中整合素β1唾液酸化程度明顯下調(diào)。
　　5.在JAR細(xì)胞中，經(jīng)siRNA干擾后與整合素β1相關(guān)的FAK，AKT，ERK蛋白的活性形式均有明顯下調(diào)，而磷酸化ERK抑制劑處理細(xì)胞后能下調(diào)ST6Gal-Ⅰ及唾液酸化總蛋白的表達(dá)。
　　綜上所述，人絨毛膜癌細(xì)胞(JAR)的遷移能力強(qiáng)于人正常絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞（HTR-8/Svneo），可能與兩種細(xì)胞中ST6Gal-Ⅰ的蛋白表達(dá)的差異有關(guān)。ST6Gal-Ⅰ可通過上調(diào)整