新生期卡介苗接種對(duì)BALB-c小鼠脾和肺樹突狀細(xì)胞表型和功能的影響.pdf

1、背景與目的:支氣管哮喘是兒童時(shí)期最常見的慢性疾病之一，其本質(zhì)為多種炎癥細(xì)胞介導(dǎo)的慢性氣道炎癥。“衛(wèi)生學(xué)假說”認(rèn)為在西方國(guó)家由于公共衛(wèi)生設(shè)施的改善、疫苗及抗生素的使用，感染發(fā)生率降低，機(jī)體Th1功能發(fā)育障礙，造成Th1/Th2功能失衡，進(jìn)而導(dǎo)致了哮喘等變態(tài)性疾病發(fā)生率大幅度增加。然而，近年來研究表明單純Th1/Th2功能失衡不能解釋哮喘全部的發(fā)病機(jī)制。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)，新生期腹腔接種卡介苗(BCG)后，可促進(jìn)小鼠脾臟中Th1/Tr1發(fā)育

2、，且能減輕哮喘氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性(AHR)的發(fā)生，但對(duì)肺部支氣管肺泡灌洗液(BALF)中Th1/Th2細(xì)胞因子無明顯影響，其機(jī)制尚不清楚。近年來，樹突狀細(xì)胞(DC)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tr)在哮喘發(fā)病中的作用引起人們廣泛關(guān)注。作為專職抗原提呈細(xì)胞(APC)，DC不僅能啟動(dòng)原發(fā)免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)Th0細(xì)胞向不同的T細(xì)胞亞群分化發(fā)育，同時(shí)可誘導(dǎo)免疫耐受。為了進(jìn)一步明確新生期BCG接種對(duì)T細(xì)胞亞群分化發(fā)育的作用機(jī)制，本研究觀察了新生期BCG接種后

3、BALB/c小鼠脾臟和肺DC表型、細(xì)胞因子分泌及肺部T細(xì)胞改變。 方法:將新生清潔級(jí)BALB/c小鼠分為BCG腹腔接種組、BCG皮下接種組和對(duì)照組，同時(shí)以清潔級(jí)BALB/c成年鼠作為對(duì)照。接種4周后： (1)取脾細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC亞型及成熟度；脾細(xì)胞分離后，體外用BCG再刺激培養(yǎng)后ELISA檢測(cè)上清液細(xì)胞因子； (2)取肺細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC亞型及成熟度，肺細(xì)胞分離培養(yǎng)后ELISA檢測(cè)上清液細(xì)胞因子，

4、同時(shí)RT-PCR 檢測(cè)肺T細(xì)胞特異表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子mRNA的表達(dá)。 結(jié)果: 第一部分：新生期BCG接種對(duì)BALB/c小鼠脾DC表型和功能的影響： (1)與對(duì)照組比較，新生期腹腔接種BCG后，小鼠脾CD8α<'+>DC 百分率明顯增加，CD8α<'->DC百分率顯著減低，明顯上調(diào)CD8α<'->DC的CD40和CD8α<'+>DC的CD86表達(dá)，LPS體外誘導(dǎo)的脾臟細(xì)胞培養(yǎng)上清液細(xì)胞因子IL-12p70和BCG體外誘

5、導(dǎo)的IL-10水平明顯升高，IL-6無明顯改變。 (2)成年期腹腔接種BCG后，小鼠脾CD8α<'->DC百分率明顯高于對(duì)照組，CD8α<'+>DC百分率明顯低于對(duì)照組，CD8α<'->及CD8α<'+>DC表面的CD40、MHC-Ⅱ類分子表達(dá)明顯上調(diào)，而CD86表達(dá)顯著下調(diào)。 (3)成年期BCG腹腔接種后，小鼠脾臟CD8α<'->DC百分率明顯高于新生期BCG腹腔接種組，CD8α<'+>DC百分率顯著低于新生期BCG腹

6、腔接種組。DC表面共刺激分子及MHC-Ⅱ類分子表達(dá)兩組之間無明顯差異。 (4)新生期腹腔和皮下接種BCG后，小鼠脾DC亞型和表面共刺激分子表達(dá)無明顯差別。 第二部分：新生期BCG接種對(duì)BALB/c小鼠肺DC及T細(xì)胞的影響： (1)BALB/c小鼠肺DC主要為CD8α<'->DC，低水平表達(dá)MHC-Ⅱ類分子；新生期腹腔接種BCG后，小鼠肺CD8α<'->CDC和CD8a<'+>DC的百分率與對(duì)照組無明顯差異，顯著上

7、調(diào)CD8α<'->DC及CD8α<'+>DC的MHC-Ⅱ類分子表達(dá)，肺細(xì)胞培養(yǎng)上清液細(xì)胞因子IL-12p70及IL-6水平與對(duì)照組無明顯差別。 (2)新生期腹腔接種BCG后，小鼠肺部CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞百分率及Foxp3、T-bet、GATA-3 mRNA表達(dá)與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (3)成年期腹腔接種BCG后，小鼠肺CD8α<'->DC百分率顯著高于對(duì)照組，CD8α<'+>DC百分率明顯低于對(duì)照組；

8、CD8α<'->DC的MHC-Ⅱ類分子表達(dá)顯著高于對(duì)照組。 (4)新生期和成年期腹腔接種BCG后，小鼠肺DC表型及Foxp3、T-bet、GATA-3 mRNA表達(dá)無明顯差別。 (5)新生期腹腔接種和皮下接種：BCG后的小鼠肺DC亞型及Foxp3、T-bet、GATA-3 mRNA表達(dá)無明顯差別，而新生期腹腔接種BCG組CD8α<'->DC及CD8α<'+>DC的MHC-Ⅱ類分子表達(dá)顯著高于新生期皮下接種 BCG組。

9、 結(jié)論： 1．新生期BCG接種改變BALB/c小鼠脾DC的表型和功能，表現(xiàn)為CD8α<'+>DC百分率增加，CD8α<'->DC百分率減少，脾細(xì)胞接受再次刺激時(shí)的細(xì)胞因子IL-12p70或IL-10水平明顯升高，提示新生期BCG接種可能通過作用于BALB/c小鼠脾DC誘導(dǎo)脾Th1/Tr1反應(yīng)。 2．新生期BCG接種盡管能促進(jìn)BALB/c小鼠肺部 DC成熟，但在轉(zhuǎn)錄因子水平再次證實(shí)新生期BCG接種對(duì)小鼠肺部T細(xì)胞亞群分