臍血與成人外周血樹突狀細胞表型和功能的比較研究.pdf

1、中山大謦碩士學位論文y767239臍血與成人外周血樹突狀細胞表型和功能的比較研究專業(yè)：婦產(chǎn)科學碩士研究生：林’勝謀導師：方群教授答辯委員會主席：答辯委員會成員：鋤甥硼％、；：知衙”瓤列2005年5月廣州臍呲與成人外周血樹突狀細胞表型和功能的比較研究中文摘要材料與方法1研究對象本實驗共收集足月健康新生兒臍血15例，健康成人外周血20例。2樹突狀細胞的分離與培養(yǎng)本實驗采用密度梯度離心法分離臍血(或外周血)單個核細胞，培養(yǎng)2h后取粘附細胞在含

2、rhGMCSF和rhIL一4的RPMll640培養(yǎng)液中培養(yǎng)。第6天加入TNFq刺激24h。3淋巴細胞的分離及保存非粘附細胞以含rhlL2的RPⅦ1640培養(yǎng)，作為反應細胞。4DC表面標志分析第7天流式細胞儀檢測DC表型分子CD83、CD86和HLA—DR的表達。5混合淋巴反應培養(yǎng)7天后經(jīng)絲裂霉素處理過的DC和自體／異體淋巴細胞按20：l的比率混合培養(yǎng)72h，MTT(噻唑藍)法檢測淋巴細胞增殖反應，計算DC的刺激指數(shù)(SI)。結果1樹突狀

3、細胞的鑒定培養(yǎng)第7天，倒置顯微鏡下見臍血或外周血誘導的細胞均表現(xiàn)出典型的樹突狀細胞形態(tài)。透視電鏡可見細胞膜大量皺褶和不規(guī)則突起：細胞體積顯著增大，胞漿中富含線粒體。流式細胞儀檢測顯示兩組DC均高度表達HLADR(臍血962％60％，外周血955％32％)，中高度表達輔助刺激分子CD86(臍血646％83％，外周血795％497％)，中低度表達樹突狀細胞特異性標志CD83(臍血309％82％，外周血346％97％)；而單核細胞特異性標志C