小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)成肝樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增、鑒定小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)；體外誘導(dǎo)小鼠BMSCs定向分化為肝樣細(xì)胞，提高分化效能。 方法：分離C57小鼠的BMSCs，觀察其形態(tài)學(xué)變化。FACS檢測(cè)CD34、CD105，體外誘導(dǎo)BMSCs向骨、脂肪、軟骨細(xì)胞分化。P1BMSCs加以HGF、FGF4、EGF、OSM為主要誘導(dǎo)因子的誘導(dǎo)液成肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)為實(shí)驗(yàn)組；對(duì)照組加基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng)。相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，并分別于培養(yǎng)第7、14、21

2、天：免疫組化檢測(cè)ALB的蛋白質(zhì)合成；RT-PCR檢測(cè)aFP、ALB、CK18、TAT和CYP2b9的mRNA表達(dá)； FACS測(cè)定ALB和CK18蛋白標(biāo)記的陽(yáng)性率。 結(jié)果：BMSCs貼壁生長(zhǎng)，呈長(zhǎng)梭形。FACS檢測(cè)P1 BMSCs CD34陰性、CD105陽(yáng)性；BMSCs成骨誘導(dǎo)檢測(cè)鈣結(jié)節(jié)、AKP、OCN陽(yáng)性；成脂肪誘導(dǎo)細(xì)胞油紅O染色陽(yáng)性；成軟骨表達(dá)誘導(dǎo)Ⅱ型膠原。誘導(dǎo)組在培養(yǎng)第14天細(xì)胞分布呈典型的鋪路石狀；對(duì)照組細(xì)胞為長(zhǎng)梭形。在

3、培養(yǎng)的第7、14、21天，誘導(dǎo)組細(xì)胞ALB免疫組化染色和aFP、ALB、CK18的mRNA檢測(cè)均為陽(yáng)性；第14、21天，細(xì)胞表達(dá)TAT、CYP2b9mRNA；對(duì)照組除aFP的mRNA呈弱陽(yáng)性外，其余均為陰性。第7、14、21天，誘導(dǎo)組FACS檢測(cè)CK18蛋白的陽(yáng)性率分別為(71.42±4.98)％、(75.88±2.23)％、(80.58±2.14)％；ALB蛋白的陽(yáng)性率分別為(74.98±3.28)％、(79.69±2.99)％、(8