乙型肝炎病毒表面抗原ELISA試劑盒部分關(guān)鍵點(diǎn)的建立.pdf

1、乙型病毒肝炎是由乙肝病毒引起的，通過(guò)血液和體液傳播的、以肝臟損害為主的傳染病。全世界約有3.5億的乙肝病毒攜帶者，其中九千萬(wàn)發(fā)展為繼發(fā)性肝病，由于乙肝病毒感染及其繼發(fā)病而死亡的患者每年超過(guò)100萬(wàn)人。我國(guó)是乙肝病毒感染的高發(fā)區(qū)，約1.2億人感染乙肝病毒，3000萬(wàn)人患慢性肝炎，每年死于乙肝病毒導(dǎo)致的肝癌、肝硬化者約35萬(wàn)人。
　　 目前乙肝病毒的檢測(cè)方法中，較為廣泛采用的是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法，將小鼠HBsAg特異性

2、單克隆抗體包被到微孔板上，然后將樣本加入微孔中，再與辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的單克隆小鼠二抗結(jié)合后可直接檢測(cè)不同的抗原決定簇，在樣本中存在有HBsAg時(shí)，形成特異性免疫復(fù)合物，并被固相載體捕獲。隨后加入底物，在有HBsAg免疫復(fù)合物存在時(shí)，無(wú)色的底物經(jīng)酶催化形成有顏色的終產(chǎn)物。終止酶反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀測(cè)量吸光度值。
　　 本文研究了最佳的抗乙型肝炎病毒表面抗原S蛋白的單克隆抗體(IgG mAbS1)的蛋白濃度和包被濃度，以及抗

3、S蛋白另一表位單克隆抗體和辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物(IgG mAb S2-HRP)的稀釋度。方法是將IgG mAb S1蛋白包被濃度分別為2.5、3、3.5、4μg/mL的微板，與不同稀釋度(1∶30、1∶60、1∶120)的IgGmAbS2-HRP酶結(jié)合物交叉進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，當(dāng)IgG mAb S1蛋白濃度為3.5μg/ml以及IgG mAbS2-HRP酶結(jié)合物的稀釋度為1/30時(shí)，ELISA試劑盒的效果最優(yōu)；另外將IgG mAbS2-HRP酶結(jié)