RNAi干擾MRP2表達逆轉結腸癌細胞對長春新堿的耐藥性.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的： 化療一直是以手術為主的大腸癌綜合治療的重要手段，而多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)是臨床化療效果不佳的主要原因，多藥耐藥的發(fā)生機制之一是多藥耐藥相關蛋白2(multidrug resistanceassociated protein2，MRP2)基因以及蛋白(ABCC2蛋白)的高表達。RNA干擾(RNA imerference，RNAi)自1998年Fire等[1]首次報道以來已成為一種特異性

2、抑制靶基因表達的有效工具。本研究通過構建MRP2基因的小干擾RNA(small interfere RNA，siRNA)真核表達載體，觀測其對MRP2基因的沉默作用，探討應用RNA干擾逆轉腫瘤耐藥的可能性，探索促進腫瘤治療的新策略，為進一步實驗提供技術手段。 方法： 1.針對MRP2基因序列，篩選，設計，合成siRNA相關基因片段，構建高特異性Pgenesil-1-MRP2-siRNA，酶切鑒定及測序驗證插入序列正確性。

3、 2.脂質體法將Pgenesil-1-MRP2-siRNA轉染至結腸癌耐長春新堿細胞株(HCT-8/V細胞株)，用定量RT-PCR和Western blot檢測siRNA阻斷MRP2的表達效率。 3.MTT實驗測定Pgenesil-1-MRP2-siRNA和長春新堿對HCT-8/V細胞增殖抑制作用。 結果： 1.成功構建出針對MRP2基因的siRNA表達載體：Pgenesil-1-MRP2-siRNA。

4、 2.用脂質體法成功轉染至HCT-8/V細胞，通過定量RT-PCR和Western blot檢測靶細胞MRP2-mRNA及蛋白(ABCC2蛋白)表達均較對照組明顯下降，其受抑制率分別為68.6％和75.9％(P＜0.05)。 3.在相同濃度化療藥物的作用下，MTT分析結果顯示RNA干擾組細胞凋亡比例高于對照組(P＜0.05)，表明細胞耐藥性下降。 結論： 1.應用表達載體法成功構建針對MRP2基因的siRN

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