糖尿病大鼠肺泡巨噬細胞TLR2的表達及對肽聚糖反應性的研究.pdf

1、目的：肺臟作為糖尿病損害的靶器官本世紀70年代以來才逐漸被大家關注，廣泛涉及肺功能、生化代謝、肺組織病理等諸多方面，其中肺局部防御功能降低所致下呼吸道感染最為常見。Toll樣受體(Toll like receptors，TLRs)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種同源于果蠅Toll的蛋白分子，在對抗細菌的先天免疫過程中發(fā)揮了關鍵的作用，并且與糖尿病密切相關，現(xiàn)已日益受到關注。TLRs能夠對病原體識別、結合，引發(fā)一系列信號間的轉導，促進各種炎性介質的釋

2、放。在這個大家族中TLR2和TLR4最為受關注，TLR2能識別許多病原菌相關分子模式，包括革蘭氏陽性球菌的肽聚糖，此次實驗我們研究了肽聚糖刺激下TLR2在正常大鼠及糖尿病大鼠肺泡巨噬細胞表達，希望能進一步了解糖尿病病人肺部免疫機能變化的機制，以期為感染和糖尿病的關系提供進一步的證據(jù)，并為糖尿病感染的治療和控制提供新的作用點。 方法：選用健康雄性Wistar大鼠32只，SPF級，鼠齡12周，體重(200±20)克。采用Univer

3、sal32R離心機、血糖儀、鏈脲佐菌素(STZ)、肽聚糖(PGN staphylococcus aureus)、兔抗鼠TLR2。1.動物模型制備及分組：將32支雄性健康Wistar大鼠，體重約200克左右，隨機分為4組：正常對照組(A組，n=8)，糖尿病組(B組，n=8)，正常+PGN組(C組，n=8)，糖尿病+PGN組(D組，n=8)。糖尿病組一次性腹腔注射鏈脲佐菌素60mg/kg體重，正常對照組注射同等劑量枸櫞酸—枸櫞酸鈉緩沖溶液，

4、72小時后隨機血糖≥16.67mmol/L為糖尿病模型成功，以后每周復查1次血糖，連續(xù)觀察4周。2.肺泡巨噬細胞的獲取及培養(yǎng)：大鼠用水合氯醛麻醉成功后，經(jīng)氣管插管行支氣管肺泡灌洗，回收BALF，巨噬細胞培養(yǎng)，C組及D組加入終濃度為10ug/ml PGN孵育。3.免疫細胞化學染色：采用免疫細胞化學染色SABC法，染色時兔抗鼠TLR2的濃度為1：200。陽性反應為胞膜和胞漿呈棕黃色著色。4.TLR2 mRNA表達測定。5.統(tǒng)計分析：采用SP

5、SS13.0統(tǒng)計軟件處理，實驗數(shù)據(jù)用x±s表示，各組間指標比較用雙因素雙水平析因分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果：1.免疫細胞化學結果：正常組大鼠肺泡巨噬細胞TLR2表達，以胞漿及胞膜為主呈較淡的棕黃色改變；糖尿病組細胞TLR2在上述部位表達漸增多，顏色稍加深；正常+PGN組及糖尿病+PGN組細胞的胞漿及胞膜呈深棕黃色改變，部分細胞變性壞死。平均光密度值：正常組0.1146±0.002，糖尿病組0.1731±0.01

6、1，正常+PGN組0.2059±0.011，糖尿病+PGN組0.2931±0.017。2.TLR2 mRNA表達：正常組0.898±0.084，糖尿病組1.202±0.07，正常+PGN組1.628±0.11，糖尿病+PGN組2.307±0.13。糖尿病因素及肽聚糖因素導致肺巨噬細胞內TLR2表達增高，P<0.001，糖尿病及肽聚糖有較明顯的主效應以及交互作用。 結論：糖尿病可促進大鼠肺泡巨噬細胞TLR2表達，使機體處于促炎癥狀