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文檔簡介
1、目的:肺臟作為糖尿病損害的靶器官本世紀70年代以來才逐漸被大家關注,廣泛涉及肺功能、生化代謝、肺組織病理等諸多方面,其中肺局部防御功能降低所致下呼吸道感染最為常見。Toll樣受體(Toll like receptors,TLRs)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種同源于果蠅Toll的蛋白分子,在對抗細菌的先天免疫過程中發(fā)揮了關鍵的作用,并且與糖尿病密切相關,現(xiàn)已日益受到關注。TLRs能夠對病原體識別、結合,引發(fā)一系列信號間的轉導,促進各種炎性介質的釋
2、放。在這個大家族中TLR2和TLR4最為受關注,TLR2能識別許多病原菌相關分子模式,包括革蘭氏陽性球菌的肽聚糖,此次實驗我們研究了肽聚糖刺激下TLR2在正常大鼠及糖尿病大鼠肺泡巨噬細胞表達,希望能進一步了解糖尿病病人肺部免疫機能變化的機制,以期為感染和糖尿病的關系提供進一步的證據(jù),并為糖尿病感染的治療和控制提供新的作用點。 方法:選用健康雄性Wistar大鼠32只,SPF級,鼠齡12周,體重(200±20)克。采用Univer
3、sal32R離心機、血糖儀、鏈脲佐菌素(STZ)、肽聚糖(PGN staphylococcus aureus)、兔抗鼠TLR2。1.動物模型制備及分組:將32支雄性健康Wistar大鼠,體重約200克左右,隨機分為4組:正常對照組(A組,n=8),糖尿病組(B組,n=8),正常+PGN組(C組,n=8),糖尿病+PGN組(D組,n=8)。糖尿病組一次性腹腔注射鏈脲佐菌素60mg/kg體重,正常對照組注射同等劑量枸櫞酸—枸櫞酸鈉緩沖溶液,
4、72小時后隨機血糖≥16.67mmol/L為糖尿病模型成功,以后每周復查1次血糖,連續(xù)觀察4周。2.肺泡巨噬細胞的獲取及培養(yǎng):大鼠用水合氯醛麻醉成功后,經(jīng)氣管插管行支氣管肺泡灌洗,回收BALF,巨噬細胞培養(yǎng),C組及D組加入終濃度為10ug/ml PGN孵育。3.免疫細胞化學染色:采用免疫細胞化學染色SABC法,染色時兔抗鼠TLR2的濃度為1:200。陽性反應為胞膜和胞漿呈棕黃色著色。4.TLR2 mRNA表達測定。5.統(tǒng)計分析:采用SP
5、SS13.0統(tǒng)計軟件處理,實驗數(shù)據(jù)用x±s表示,各組間指標比較用雙因素雙水平析因分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果:1.免疫細胞化學結果:正常組大鼠肺泡巨噬細胞TLR2表達,以胞漿及胞膜為主呈較淡的棕黃色改變;糖尿病組細胞TLR2在上述部位表達漸增多,顏色稍加深;正常+PGN組及糖尿病+PGN組細胞的胞漿及胞膜呈深棕黃色改變,部分細胞變性壞死。平均光密度值:正常組0.1146±0.002,糖尿病組0.1731±0.01
6、1,正常+PGN組0.2059±0.011,糖尿病+PGN組0.2931±0.017。2.TLR2 mRNA表達:正常組0.898±0.084,糖尿病組1.202±0.07,正常+PGN組1.628±0.11,糖尿病+PGN組2.307±0.13。糖尿病因素及肽聚糖因素導致肺巨噬細胞內TLR2表達增高,P<0.001,糖尿病及肽聚糖有較明顯的主效應以及交互作用。 結論:糖尿病可促進大鼠肺泡巨噬細胞TLR2表達,使機體處于促炎癥狀
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