MPTP導致的小鼠紋狀體多巴胺轉運蛋白及多巴胺含量的變化.pdf

1、目的:多巴胺轉運蛋白(dopamine transporter,DAT)是位于紋狀體多巴胺(dopamine,DA)能神經末梢突觸前膜的一種膜蛋白,能將突觸間隙內的DA重新攝入到突觸前膜,調節(jié)突觸間隙DA的濃度。已有研究證明臨床上已診斷為帕金森病(Parkinson's disease,PD)的患者的DAT已有很大的下降,而DA能神經元損傷過程中紋狀體DAT和DA含量的動態(tài)變化情況尚未見報道,恰恰該方面研究可為PD的病因、早期診斷及治療

2、提供重要依據。1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)慢性損傷的PD模型表現為進行性發(fā)展的趨勢,形態(tài)學研究表明與PD中DA能神經元的損傷類似,因此本實驗應用MPTP慢性損傷小鼠建立PD模型,以黑質酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫組化染色的陽性(TH+)細胞反應DA神經元損傷情況,檢測DA能神經元損傷

3、過程中紋狀體DAT和DA含量的動態(tài)變化,探討兩者之間的關系。
　　 方法:將C57BL/6小鼠分實驗組、對照組。實驗組給予MPTP25mg/kg腹腔注射,對照組給予相同劑量的生理鹽水,每周2次,連續(xù)五周。用于行為學檢測的小鼠在每周第2次給藥后第1天,采用懸掛實驗觀察其行為變化;行生化檢測的小鼠在每周第2次給藥后第1天取材,采用免疫組化法觀察黑質致密部TH的表達;采用免疫印跡法檢測紋狀體DAT表達水平;采用高效液相色譜-質譜聯用法

4、檢測紋狀體DA含量,結合資料進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果:1.行為學結果顯示隨著給藥時間延長,實驗組小鼠懸掛測試評分逐漸下降,于第4周開始與對照組比較,具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。2.免疫組化結果顯示實驗組小鼠中腦黑質TH+神經細胞數目逐漸減少,從第3劇開始與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),從4周開始與對照組比較,具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。3.免疫印跡法結果顯示實驗組小鼠紋狀體的DAT的表達量逐漸下

5、降,從第2周開始與對照組比較,具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),從第4周開始與對照組比較,具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。4.高效液相色譜-質譜檢測結果顯示實驗組小鼠紋狀體DA含量逐漸下降,從給藥2周后與對照組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),從第3周開始與對照組比較,具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。5.實驗組小鼠紋狀體DAT的表達量和DA含量明顯相關,相關系數為0.96(P＜0.001),而且兩者與中腦黑質TH+神經細胞計數