牙齦成纖維細(xì)胞-玉米醇溶蛋白——中藥雙黃補(bǔ)復(fù)合體對實(shí)驗(yàn)性牙周骨缺損修復(fù)的作用.pdf

1、目的:
　　 牙周炎是累及牙周支持組織的炎癥性、破壞性疾病，主要臨床表現(xiàn)有牙周袋形成，牙周附著喪失和牙槽骨吸收。牙周炎的患病率及嚴(yán)重程度隨年齡增高而增加?？谇涣餍胁W(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，牙周炎已成為我國成年人牙齒喪失的首位原因，嚴(yán)重影響患者的咀嚼功能和牙周美觀。醫(yī)學(xué)研究表明牙周炎與多種全身性疾病相互關(guān)聯(lián)，牙周炎對血脂、血糖水平的影響可能是增加心血管疾病、糖尿病等系統(tǒng)疾病發(fā)病機(jī)率的重要原因[1]。在牙周炎的臨床治療方面，傳統(tǒng)的局部、全身

2、藥物及牙周基礎(chǔ)治療可以控制牙齦炎癥，改善牙周狀態(tài)，但對于牙周組織的重建收效甚微，因此，如何使已破壞和喪失的牙周組織修復(fù)和再生，恢復(fù)牙周的美觀外形和正常的咀嚼功能成為臨床上亟需解決的問題。牙周組織工程技術(shù)的出現(xiàn)為實(shí)現(xiàn)牙周組織的修復(fù)再生提供了全新的思路。
　　 牙周組織工程是利用生命科學(xué)和生物材料學(xué)的原理、方法和技術(shù)重建新的具備原有形態(tài)和功能的牙周組織，達(dá)到修復(fù)和再生的目的，其包含種子細(xì)胞、支架材料與生長因子三大基本要素。本研究選用

3、中藥雙黃補(bǔ)作為生長因子，將牙齦成纖維細(xì)胞作為種子細(xì)胞與玉米醇溶蛋白支架材料結(jié)合，應(yīng)用于動物人工骨缺損模型中，觀察牙齦成纖維細(xì)胞-玉米醇溶蛋白-雙黃補(bǔ)復(fù)合體在牙周組織工程應(yīng)用中對牙周組織修復(fù)的影響，研究其促進(jìn)牙周組織再生的病理生理機(jī)制，為中藥在牙周組織工程的開發(fā)和應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 以2只Beagle犬雙側(cè)上頜54(⊥)45、下頜743(⊥)347共20個(gè)牙位作為實(shí)驗(yàn)部位，將其配對分為四組，每組5個(gè)牙位

4、分別制備骨缺損模型，實(shí)驗(yàn)組Ⅰ:翻瓣術(shù)+玉米醇溶蛋白支架植入，實(shí)驗(yàn)組Ⅱ:翻瓣術(shù)+牙齦成纖維細(xì)胞-玉米醇溶蛋白支架植入，實(shí)驗(yàn)組Ⅲ:翻瓣術(shù)+牙齦成纖維細(xì)胞-玉米醇溶蛋白-中藥雙黃補(bǔ)復(fù)合體植入，對照組:單純翻瓣術(shù)。于術(shù)后3個(gè)月獲取標(biāo)本，根據(jù)錐形束CT檢查、組織學(xué)測量指標(biāo)（骨缺損高度、新生牙槽骨高度、新生牙骨質(zhì)高度、結(jié)合上皮長度）以及免疫組化染色半定量分析骨形成蛋白-2(Bonemorphogeneticproteins-2，BMP-2)及骨唾液

5、蛋白(Bonesialoprotein，BSP)的表達(dá)，研究牙齦成纖維細(xì)胞-玉米醇溶蛋白-雙黃補(bǔ)復(fù)合體促進(jìn)牙周組織再生的作用和機(jī)制。
　　 結(jié)果:
　　 1.組織學(xué)觀察
　　 術(shù)后3個(gè)月光學(xué)顯微鏡下觀察，實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ及對照組牙齦區(qū)及牙周膜均可見炎細(xì)胞浸潤，實(shí)驗(yàn)組Ⅲ未見明顯炎癥細(xì)胞;實(shí)驗(yàn)組Ⅰ骨缺損區(qū)顯示新骨及牙骨質(zhì)生成，骨小梁纖細(xì)，圍繞大量的纖維組織;實(shí)驗(yàn)組Ⅱ可見片狀新骨結(jié)構(gòu)，骨缺損邊緣成骨細(xì)胞成行排列，牙周膜內(nèi)新

6、生血管數(shù)目較多;實(shí)驗(yàn)組Ⅲ顯示大量漸趨成熟的新骨組織，可見哈弗氏系統(tǒng);對照組缺損區(qū)以纖維化骨為主，可見成骨細(xì)胞及成牙骨質(zhì)細(xì)胞。四組均有明顯結(jié)合上皮根移。
　　 2.組織學(xué)測量結(jié)果
　　 實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ術(shù)后3個(gè)月新生牙槽骨分別為1.02±0.09mm、1.03±0.06mm和1.14±0.07mm，均高于對照組新生牙槽骨高度測量值0.96±0.06mm(P＜0.05)，其中實(shí)驗(yàn)組Ⅲ新骨生成效果更顯著(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組

7、Ⅲ新生牙骨質(zhì)高度為1.00±0.08mm，高于對照組新生牙骨質(zhì)高度測量值0.91±0.10mm(P＜0.05);而術(shù)后四組的結(jié)合上皮長度值差異無顯著性意義(P＞0.05）。
　　 3.錐形束CT檢查
　　 錐形束CT檢查實(shí)驗(yàn)組Ⅰ骨缺損區(qū)有新骨形成，邊緣模糊，與周圍骨組織逐漸融合;實(shí)驗(yàn)組Ⅱ顯示骨缺損區(qū)可見點(diǎn)片狀密度較高的影像;實(shí)驗(yàn)組Ⅲ顯示骨缺損區(qū)大量新骨生成，缺損邊緣皮質(zhì)骨連續(xù)，呈現(xiàn)明顯的阻射影;對照組骨缺損區(qū)面積縮小，低

8、密度影較各實(shí)驗(yàn)組多。實(shí)驗(yàn)組成骨較對照組多，且實(shí)驗(yàn)組Ⅲ較實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ高密度影增多。
　　 4.牙槽骨骨密度測量結(jié)果
　　 實(shí)驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ牙槽骨骨密度的差值百分比低于對照組的骨密度差值百分比(P＜0.05），且實(shí)驗(yàn)組Ⅲ的骨密度的差值百分比低于實(shí)驗(yàn)組Ⅱ?qū)?yīng)值(P＜0.05），而實(shí)驗(yàn)組Ⅰ與對照組的差值百分比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 5.免疫組化結(jié)果
　　 骨形成蛋白-2陽性表達(dá)定位于胞漿，以胞漿中出

9、現(xiàn)棕黃色顆?；驁F(tuán)塊者為陽性細(xì)胞。四組中骨形成蛋白-2均有陽性表達(dá)，新生牙槽骨周圍可見成骨細(xì)胞陽性著色，新生牙骨質(zhì)邊緣的成牙骨質(zhì)細(xì)胞也為陽性著色;實(shí)驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ的BMP-2表達(dá)為中度陽性，明顯高于對照組弱陽性(P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組Ⅰ的BMP-2陽性細(xì)胞數(shù)略高于對照組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 骨唾液蛋白陽性表達(dá)于胞漿，呈棕黃色著色。四組中骨唾液蛋白均有陽性表達(dá)，成牙骨質(zhì)細(xì)胞、成骨細(xì)胞胞漿中可見棕黃色顆?；驁F(tuán)塊。與空

10、白對照組相比，實(shí)驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ的骨唾液蛋白中度陽性表達(dá)，陽性細(xì)胞數(shù)明顯增高(P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組Ⅰ與對照組均為弱陽性，陽性細(xì)胞數(shù)比較無顯著性差異(P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.牙齦成纖維細(xì)胞-玉米醇溶蛋白-雙黃補(bǔ)復(fù)合體可能通過促進(jìn)牙齦成纖維細(xì)胞增殖繼而向成骨細(xì)胞分化，加快骨基質(zhì)的形成和成熟，從而促進(jìn)牙周組織的再生。
　　 2.牙齦成纖維細(xì)胞-玉米醇溶蛋白-雙黃補(bǔ)復(fù)合體能促進(jìn)BMP-2和BSP在牙周組織中