新型抗生素B7011藥代動力學研究.pdf

1、眾所周知，藥物研發(fā)過程具有風險高、投資大、周期長的特點。在藥物研發(fā)的臨床前階段，毒性問題是制約研發(fā)成功與否的主要問題之一，因此在藥物研發(fā)早期，嚴格淘汰因毒性問題不適宜進一步研發(fā)的化合物，有利于降低投資風險、節(jié)約藥物研發(fā)成本。如何在研發(fā)早期盡早發(fā)現(xiàn)候選化合物的潛在毒性，從而加快藥物研發(fā)進程、降低藥物研發(fā)費用、提高研發(fā)成功率成為毒理學研究的重要方向。
　　近年來，抗菌藥物是目前臨床藥物治療中最常用的藥物，人們越來越重視抗菌活性及抗菌活

2、性持續(xù)時間對抗菌藥物療效的影響，抗菌活性的持續(xù)時間主要與藥物的半衰期密切相關。目前用于治療G+菌包括耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)、甲氧西林敏感金葡球菌(MSSA)、凝固酶陰性葡萄球菌(CoNS)、鏈球菌等具有抗菌活性的藥物中，療效最為肯定的抗生素為萬古霉素[1]，[2]、去甲萬古霉素[3]、替考拉寧[4]等。但萬古霉素的半衰期較短為6h，用藥間隔短[1]，[2]。去甲萬古霉素[3]、替考拉寧[4]的半衰期也較短。鑒于國內(nèi)外對于抗菌藥物

3、的需求形勢[5]，[6]，B7011為一種新型半合成糖肽抗生素，作用機制為抑制G+菌細胞壁的生物合成，被廣泛用作治療皮膚和軟組織感染的藥物。B7011對于G++菌包括耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)、甲氧西林敏感金葡球菌(MSSA)、凝固酶陰性葡萄球菌(CoNS)、鏈球菌等具有抗菌活性，其具有抗菌活性強、沒有劑量限制性副作用、半衰期長的優(yōu)勢。
　　本試驗目的是揭示B7011在動物體內(nèi)動態(tài)變化規(guī)律，闡明該藥物的吸收、分布、代謝和排泄過

4、程及特點，為該藥物的藥效學和毒理學評價研究提供試驗參考資料，并為設計和優(yōu)化臨床研究方案提供依據(jù)。
　　本研究建立和確證沉淀樣品的液質(zhì)聯(lián)用儀檢測方法，從分析線性范圍、批內(nèi)批間精密度、回收率、基質(zhì)效應等指標進行方法確證。選擇SD大鼠作為實驗對象，對B7011的吸收、分布、代謝和排泄進行了部分的研究。
　　建立了分析測定SD大鼠血漿中B7011的LC-MS/MS的方法。對大鼠血漿方法學全面確證結(jié)果表明:空白SD大鼠血漿中的內(nèi)源性物

5、質(zhì)不干擾B7011的測定，方法的專屬性較好。B7011測定的線性范圍為30-20000μg/L，最低定量限均為30μg/L。SD大鼠血漿中B7011在60，1000，16000和10000μg/L測定的批內(nèi)精密度(RSD％)分別為5.61-13.31％，2.31-8.35％，2.02-9.47％和4.0-15.0％，SD大鼠血漿中B7011在60，1000，16000和10000μg/L批間精密度(RSD％)分別為10.05％、2.55

6、％、3.75％和8.58％;B7011的基質(zhì)效應85.90％～102.14％之間，60、1000和16000μg/L三個濃度測定的回收率為:114.12％、109.2％和101.06％。B7011未處理的血漿質(zhì)控樣品在4℃放置4h和-20℃放置且凍融3個周期后10天和71天條件下存放是穩(wěn)定的。大鼠血漿、膽汁、尿、糞和組織樣品中B7011測定的隨行標準曲線和質(zhì)控樣品的分析結(jié)果表明:上述生物基質(zhì)中B7011測定方法能夠滿足試驗的需要。

7、>　　建立了測定比格犬血漿中B7011的LC-MS/MS的分析方法。比格犬血漿方法學全面確證結(jié)果表明:空白比格犬血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾B7011的測定，方法的專屬性較好。B7011測定的線性范圍均為30-20000μg/L，最低定量限均為30μg/L。比格犬血漿中B7011在60，1000，16000和10000μg/L測定的批內(nèi)精密度(RSD％)分別為4.17-15.80％，2.21-19.33％，3.08-7.01％和2.64-8

8、.6％，比格犬血漿中B7011在60，1000，16000和10000μg/L批間精密度(RSD％)分別為5.08％、6.25％、6.61％和11.27％; B7011的基質(zhì)效應為84.35％～92.31％之間，60、1000和16000μg/L三個濃度測定的回收率為:109.12％、106.05％和95.97％。B7011未處理的血漿質(zhì)控樣品在在4℃放置4h和-20℃放置且凍融3個周期后10天的條件下存放是穩(wěn)定的。
　　供試品分

9、析方法學全面確證結(jié)果表明:B7011在220 nm波長有較大光吸收值，因此確定其為UV-2450紫外分光光度計測定該供試品的檢測波長。B7011在2.5-80μg/mL檢測呈現(xiàn)有良好線性關系。B7011在6，30和75μg/ml測定的批內(nèi)精密度(RSD％)分別為0.29-0.67％，0.19-0.55％和0.23-0.42％，批間精密度(RSD％)分別為4.38％、2.25％和1.52％;在室溫放置4h、冷藏放置3d具有良好穩(wěn)定性，方法

10、學驗證表明該方法符合藥物濃度檢測的要求。分析了動物給藥液濃度，SD大鼠試驗所用的B7011系列濃度（0.025、0.5和3 mg/ml）的偏差在0.54-5.54％范圍內(nèi)，保證了給予動物藥量的準確性。
　　SD大鼠單次靜脈注射B7011（0.25、5.0和30 mg/kg，n=8只/劑量，雌雄各4只），根據(jù)統(tǒng)計距參數(shù)，0.25、5.0和30 mg/kg三個劑量組的AUC(0-t)分別為:26175.19±1859.60μg/L*h

11、、580494.56±41805.61μg/L*h和3659621.61±420083.79μg/L*h;環(huán)比值為1.00∶22.18:6.30，表明B7011在動物體內(nèi)暴露量與劑量基本呈現(xiàn)線性關系;三個劑量組的平均駐留時間MRT(0-t)分別為:31.62±2.07 h、27.1±1.38 h和23.16±0.42h，消除半衰期t1/2z分別為:98.33±43.17 h、88.48±37.47h和128.66±73.29 h，三個劑

12、量之間消除半衰期無統(tǒng)計學差異，表明B7011在大鼠體內(nèi)消除慢，并且符合線性藥代動力學特征。各動力學參數(shù)無明顯性別差異。
　　SD大鼠以5 mg/kg的劑量重復靜脈注射B7011，每4天靜脈注射給藥一次，連續(xù)給藥7次，n=8只/劑量，雌雄各4只。首次給藥后，B7011的主要動力學參數(shù):AUC(0-t)為580494.56±41805.612μg·h·L-1，平均駐留時間MRT(0-t)是27.1±1.38h，消除半衰期T1/2z為8

13、8.48±37.47 h。末次給藥后的主要動力學參數(shù):AUC(0-t)為990961.07±72683.71μg·h·L-1，平均駐留時間MRT(0-t)是33.91±1.85 h，消除半衰期T1/2z為111.45±48.55 h。末次與首次給藥相比，AUC(0-t)體內(nèi)藥物暴露量增加到1.71倍，無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)，MRT(0-t)和t1/2z均有一定延長(P＞0.05)。此外，隨給藥時間延長，谷濃度有升高趨勢，說明每4天

14、給藥1次、連續(xù)7次給藥后藥物在SD大鼠體內(nèi)有一定的蓄積。
　　SD大鼠靜脈注射B7011(5mg/kg)，8只/時間點/劑量，雌雄各4只。給藥后3個采樣時間點(1h、3d和6d)，各組織臟器中B7011含量在雌雄大鼠之間無明顯差異。給藥后1h，血漿中藥物濃度最高，其次，腎臟、膀胱、脂肪中的藥物濃度相對也較高，其他組織臟器藥物濃度基本相當。給藥后3d，血漿中藥物濃度明顯下降，腎臟、腎上腺、在肝臟上升，居前三位。給藥后6天，血漿中的藥

15、物濃度繼續(xù)下降，腎上腺、腎臟、肝臟中的藥物濃度下降，但仍維持在相對較高水平。說明給藥后藥物在腎上腺、腎臟、肝臟組織臟器內(nèi)分布濃度較高。
　　SD大鼠靜脈注射5mg/kg的B7011，在尿液收集過程中，0-5h，5-12h雌雄大鼠的排泄量有差異(p＜0.05)，其他時間段雌雄之間無差異(P＞0.05)。在膽汁和糞便的排泄過程中雌雄之間無差異(P＞0.05)。0～144 h膽汁中收集到的B7011的量為給藥量的0.70±0.10％;0

16、～480 h尿液中收集到B7011的量為給藥量的14.68±5.91％;0～480 h糞便中收集到B7011的量為給藥量的0.52±0.21％。糞便和尿液中共回收到B7011為15.20％。表明大鼠靜脈注射B7011后，吸收進入體內(nèi)的藥物只有一小部分以原形被排出體外，其余藥物發(fā)生了代謝轉(zhuǎn)化。
　　藥代動力學藥效學研究表明:給藥組1mg/kg中B7011的藥-時曲線符合靜脈給藥趨勢的特點。模型對照組:隨著時間的延長菌落個數(shù)增加。實驗

17、組:0-2h時間內(nèi)實驗組與模型組菌落計數(shù)比值變化不明顯;2-4h時間內(nèi)，四個劑量的比值變化呈現(xiàn)劑量依賴趨勢，4-12h模型組菌落數(shù)變化不明顯，此時間段菌落變化呈平臺趨勢;12-48h模型組菌落數(shù)呈增長趨勢，實驗組4個劑量與模型組菌落計數(shù)比值變化明顯（比值下降到7至28倍），菌落數(shù)減少，抗菌效果呈現(xiàn)時間依賴性趨勢。
　　結(jié)論:
　　1.本研究建立了分析測定SD大鼠血漿、組織、膽汁、尿液、糞便，以及比格犬和小鼠血漿中B7011的

18、LC-MS/MS的方法。該方法的專屬性較好，線性良好，批內(nèi)、批間精密度符合方法學要求，基質(zhì)效應對樣品檢測影響小，沉淀蛋白提取標品的方法回收率較高。
　　2.B7011溶液供試品分析方法進行驗證，結(jié)果表明符合方法學要求，并分析了動物給藥液濃度，保證動物給藥量的準確性。
　　3.3個劑量（0.25、5.0和30mg/kg）的B7011單次靜脈給藥后在大鼠體內(nèi)基本呈現(xiàn)線性動力學特征，消除半衰期長，體現(xiàn)了本藥物的抗菌優(yōu)勢的動力學特征

19、。
　　4.SD大鼠以5 mg/kg的劑量，每4天靜脈注射給藥1次，連續(xù)7次。與首次給藥相比，體內(nèi)藥物暴露量略有增加。此外，隨給藥時間延長，谷濃度有升高趨勢，說明每4天給藥1次、連續(xù)7次給藥后藥物在SD大鼠體內(nèi)有一定的蓄積。
　　5.SD大鼠靜脈注射B7011（5mg/kg）后，給藥后3個采樣時間點(1h、3d和6d)，各組織臟器中B7011含量在雌雄大鼠之間無明顯差異。給藥后藥物在腎上腺、腎臟、肝臟組織臟器內(nèi)分布濃度較高，