低溫脅迫對(duì)大黃魚MIPS、SCD和CIRP基因在相關(guān)組織中表達(dá)量變化的影響.pdf

1、浙江沿海越冬大黃魚年年有凍死,為了探索大黃魚應(yīng)對(duì)低溫環(huán)境時(shí)相關(guān)基因的表達(dá)變化，本實(shí)驗(yàn)?zāi)M了大黃魚越冬季節(jié)養(yǎng)殖環(huán)境，對(duì)大黃魚進(jìn)行室內(nèi)低溫協(xié)迫實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用 cDNA末端快速擴(kuò)增（rapid amplification of cDNA ends，RACE）技術(shù)克隆部分低溫相關(guān)基因的全長(zhǎng)，并利用實(shí)時(shí)熒光定量（quantitative real-time PCR，qPCR）技術(shù)研究候選耐寒基因在正常越冬水溫（12℃）和急性、慢性降溫處理?xiàng)l件下相關(guān)組

2、織的表達(dá)量變化。研究結(jié)果如下：
　　大黃魚MIPS基因 cDNA全長(zhǎng)為2657bp，5′非編碼區(qū)（untranslated region，UTR）248bp，3′非編碼區(qū)750bp，開(kāi)放閱讀框?yàn)?659 bp，起于ATG和終于TAA，編碼一個(gè)由553個(gè)氨基酸組成的蛋白；大黃魚 SCD-1a基因 cDNA全長(zhǎng)為3125bp，5′非編碼區(qū)133bp，3′非編碼區(qū)1978bp，開(kāi)放閱讀框?yàn)?014 bp，起于ATG和終于TAA，編碼一個(gè)

3、由338個(gè)氨基酸組成的蛋白；大黃魚 SCD-1b基因 cDNA全長(zhǎng)為2647bp，5′非編碼區(qū)15bp，3′非編碼區(qū)1624bp，開(kāi)放閱讀框?yàn)?008 bp，起于ATG和終于TGA，編碼一個(gè)由336個(gè)氨基酸組成的蛋白。并對(duì)三個(gè)基因進(jìn)行跨膜域預(yù)測(cè)，結(jié)果表明 SCD-1a和SCD-1b基因編碼的蛋白有明顯的跨膜區(qū)，推測(cè)其為跨膜類蛋白。
　　大黃魚在正常越冬水溫（12℃）情況下，MIPS基因在鰓中表達(dá)量最高，在皮膚、腦、腎和脾組織中的表

4、達(dá)量低，而在肌肉、腸、肝、性腺和心組織中幾乎不表達(dá)；大黃魚 SCD-1a基因主要在肝組織中表達(dá)，SCD-1b基因主要在肝和肌肉組織中表達(dá)，在其他組織中少量表達(dá)或幾乎不表達(dá)；大黃魚 CIRP基因在10種組織中均有表達(dá)，肝中表達(dá)量最高，性腺中表達(dá)最少。
　　緩慢降溫路線為：12℃→10℃→8℃→6℃，降溫速率為0.5℃/d。經(jīng)慢性低溫脅迫后，MIPS基因在鰓、皮膚、和心組織中均呈先顯著上升后顯著下降的趨勢(shì)，腦和肌肉組織則在整個(gè)脅迫過(guò)程

5、中呈持續(xù)升高趨勢(shì)。CIRP基因在鰓、皮膚、腎和心四個(gè)組織中最先發(fā)生響應(yīng)，隨后是肌肉組織。SCD-1a基因鰓組織呈升高趨勢(shì)，脾、肌肉、腸和腦組織先升高后下降，肝組織呈下降趨勢(shì)。SCD-1b基因皮膚和腦呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，肌肉、腸和心組織先上升后下降，肝組織表達(dá)量持續(xù)在高水平，變化不顯著。
　　急性降溫幅度為：12℃→8℃，取樣時(shí)間點(diǎn)為0 h、0.5 h、2 h、4 h。經(jīng)急性性低溫脅迫后，MIPS基因除腸組織以外其他組織的表達(dá)量總體呈上升