細顆粒物對H9c2心肌細胞生長及β1受體基因甲基化并表達的影響.pdf

1、目的：1．研究細顆粒物(PM2.5)對心肌細胞活力的影響。2．研究PM2.5對心肌細胞β1受體表達的影響，并探討其可能機制。
　　 方法：本次研究收集本市大氣非工業(yè)區(qū)PM2.5，采樣日期為2010年12月-2011年3月。以H9c2大鼠心肌細胞作為研究對象。用不同濃度的PM2.5水溶性及非水溶性成分干預24h。設定1μg/ml為低濃度、10μg/ml為中濃度、100μg/ml為高濃度。在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，用MTT法測定細

2、胞存活率。用甲基化特異性PCR(MSP)測定β1受體基因啟動子區(qū)域甲基化修飾水平。用RT-PCR、熒光定量PCR法分析該基因mRNA表達的差異。用Western Blot法測定蛋白表達差異。
　　 結果：
　　 1．PM2.5對心肌細胞活力的影響：PM2.5干預H9c2心肌細胞后，細胞存活率在對照組為100.0(％)，水溶性成分組低、中、高濃度時分別為95.0±2.5(％)、89.0±2.3(％)、84.0±2.8(％)

3、；非水溶性成分組低、中、高濃度時分別為95.8±2.5(％)、82.6±2.2(％)、57.7±2.0(％)。顯示：在1-100μg/ml范圍內，細胞活性隨著PM2.5濃度的增加受到了明顯的抑制，和對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。相同濃度下，非水溶成分對細胞活力的影響較水溶性成分明顯(P＜0.05)。
　　 2.PM2.5對心肌細胞β1受體基因啟動子區(qū)域甲基化修飾水平的影響：PM2.5干預H9c2心肌細胞后，β1受

4、體基因啟動子區(qū)域甲基化修飾狀態(tài)在對照組為69.71±1.63(％)，水溶性成分組時低、中、高濃度時分別為68.00±1.49(％)、61.00±1.21(％)、55.94±1.53(％)；非水溶性成分組低、中、高濃度時分別為62.09±1.45(％)、49.06±0.96(％)、36.78±2.22(％)。顯示：在1-100μg/ml范圍內，隨PM2.5濃度增高，β1受體基因啟動子區(qū)域甲基化率逐漸減低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

5、相同濃度下，非水溶成分對DNA甲基化的影響較水溶性成分明顯(P＜0.05)。
　　 3．PM2.5對心肌細胞β1受體mRNA和蛋白表達的影響：PM2.5干預H9c2心肌細胞后，mRNA相對表達量(2-ΔΔCt)在對照組為1。水溶性成分組低、中、高濃度時分別為1.08±0.06、1.27±0.05、1.71±0.10;非水溶性成分組低、中、高濃度時分別為1.30±0.05、2.28±0.14、5.70±0.23。顯示：在1-100

6、μg/ml范圍內，隨PM2.5濃度增高，β1受體mRNA表達增高，和對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。相同濃度下，非水溶成分β1受體mRNA表達較水溶性成分明顯(P＜0.05)。但在水溶性及非水溶性成分組，隨PM2.5濃度增高，蛋白表達未見明顯差異(P＞0.05)；相同濃度時，兩種成分干預后，蛋白表達亦無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結論：
　　 1．PM2.5可導致H9c2心肌細胞活力減低，并呈劑量依賴