體外轉(zhuǎn)染Klotho基因?qū)GF2誘導(dǎo)H9c2大鼠心肌細(xì)胞肥大的作用及機制.pdf

1、目的：探討轉(zhuǎn)染克老素（klotho,KL）基因?qū)A性成纖維細(xì)胞生長因子2(Fibroblast Growth Factor2,FGF-2)誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞肥大的作用及機制。
　　方法：培養(yǎng)大鼠源H9c2心肌細(xì)胞，脂質(zhì)體介導(dǎo)小鼠KL基因轉(zhuǎn)染H9c2心肌細(xì)胞，F(xiàn)GF-2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大模型。實驗分6組：對照組（Control組）、心肌細(xì)胞肥大組（FGF2組）、空載體組（pAAV組）、轉(zhuǎn)染KL基因組（KL組）、BGJ398阻斷FGF2受

2、體組（BGJ398組）、KL轉(zhuǎn)染與BGJ398聯(lián)合干預(yù)組（KL+BGJ398組）。分組處理后，RT-PCR與免疫熒光法檢測H9c2心肌細(xì)胞的KL mRNA及蛋白的表達(dá)，ELISA檢測上清液KL蛋白的含量；熒光倒置顯微鏡觀察H9c2大鼠心肌細(xì)胞形態(tài)；RT-PCR與Western blot檢測心肌肥大的標(biāo)志物心房利鈉肽(atrial natriuretic peptide，ANP)mRNA及大鼠心肌α-actin蛋白表達(dá)，Western b

3、lot檢測信號分子 PI3K、磷酸化 PI3K(p-PI3K）、AKT、磷酸化 AKT（p-AKT）蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：通過脂質(zhì)體介導(dǎo)KL基因轉(zhuǎn)染H9c2心肌細(xì)胞，可明顯下調(diào)FGF2觸發(fā)的心肌細(xì)胞α-actin蛋白及ANP mRNA的增加（P＜0.05）；心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染KL基因后，高表達(dá)外源性KL基因，并可顯著抑制FGF2引起的AKT及PI3K磷酸化（P＜0.05）；轉(zhuǎn)染KL基因組、BGJ398干1預(yù)組、KL轉(zhuǎn)染與BGJ398l