葉下珠對(duì)魚類肝損傷保護(hù)機(jī)理的研究.pdf

1、本研究選用羅非魚做試驗(yàn)動(dòng)物，探討葉下珠對(duì)魚類肝損傷的保護(hù)機(jī)理。研究主要分以下幾部分。 1.葉下珠不同提取物中沒(méi)食子酸含量的測(cè)定。 目的：為研究葉下珠不同提取物中沒(méi)食子酸含量的測(cè)定方法。 方法：應(yīng)用水提、醇提、酮提三種方法提取葉下珠，采用反向高效液相技術(shù)(RP-HPLC)測(cè)定其提取物中沒(méi)食子酸的含量。 結(jié)果：葉下珠不同提取物中，水提物中沒(méi)食子酸的含量最高，為9.473 mg.g-1。 2.葉下珠保肝

2、物質(zhì)提取工藝的優(yōu)化。 目的：對(duì)葉下珠保肝物質(zhì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。 方法：選定水提、醇提、酮提三種不同提取方法，以沒(méi)食子酸含量為指標(biāo)結(jié)合葉下珠對(duì)轉(zhuǎn)氨酶的影響，篩選確定提取方法。在此基礎(chǔ)上，選擇提取溫度、提取時(shí)間、料液比、提取次數(shù)作為主要影響因素，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行三因素三水平的正交試驗(yàn)優(yōu)化提取保肝物質(zhì)工藝條件。 結(jié)果：水提法是最佳提取方法。影響沒(méi)食子酸得率的因素先后順序?yàn)椋禾崛囟?、提取時(shí)間，料液比和提取次數(shù)。最

3、優(yōu)工藝條件為：浸提時(shí)間45min、提取溫度為100℃、料液比為1/30。 3.葉下珠對(duì)魚類肝損傷及免疫功能的影響。 目的：為研究葉下珠對(duì)魚類肝損傷及免疫功能的影響。 方法：在羅非魚基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上添加葉下殊水提物0.5％、1.0％、1.5％連續(xù)飼喂7d，CuSO4·5H2O中毒造模、采血，檢測(cè)魚血清中的肝損傷指標(biāo)(ALT、AST、ADA、LDH)和免疫指標(biāo)(AKP，ACP、MPO、溶茵酶)。 結(jié)果：各添加

4、組的肝損傷指標(biāo)，免疫指標(biāo)與對(duì)照組相比，差異極顯著(P<0.01)，而各添加組間的差異不顯著(P>0.05)。 結(jié)論：在羅非魚飼料中添加0.5％～1.5％的葉下珠可明顯抑制羅非魚肝損傷，增強(qiáng)羅非魚的免疫性能。 4.葉下珠對(duì)魚類肝臟抗氧化性能及細(xì)胞膜功能的影響 目的：為研究葉下珠對(duì)魚類肝臟抗氧化性能及細(xì)胞膜功能的影響。 方法：在羅非魚基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上添加葉下珠水提物0.5％，1.0％、1.5％連續(xù)飼喂7d，C

5、uSO4·5H2O中毒造模、采樣，檢測(cè)羅非魚肝臟中的抗氧化指標(biāo)(CAT、SOD、T-AOC，MDA)和細(xì)胞膜功能指標(biāo)(GSH-Px和Na+K+-ATPase)，同時(shí)觀察肝臟的組織學(xué)變化。 結(jié)果：各添加組的抗氧化指標(biāo)和細(xì)胞膜功能指標(biāo)與對(duì)照組相比，差異極顯著(P<0.01)，而各添加組問(wèn)的差異不顯著(P>0.05)。組織病理學(xué)顯示，給藥組魚肝細(xì)胞變性、壞死程度明顯輕于造模組，其中以高劑量組效果最好。 結(jié)論：在羅非魚飼料中添加

6、0.5％～1.5％的葉下珠可明顯提高機(jī)體的抗氧化能力，增強(qiáng)肝細(xì)胞的膜功能。 5 葉下珠對(duì)肝細(xì)胞損傷的影響 目的：為研究葉下珠對(duì)肝細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)理。 方法：通過(guò)細(xì)胞分離、培養(yǎng)，單細(xì)胞電泳等技術(shù)，觀察其對(duì)羅非魚肝細(xì)胞P450含量、NO含量、DNA損傷的影響。 結(jié)果：葉下珠添加組的肝細(xì)胞P450含量、NO含量、細(xì)胞“彗尾”出現(xiàn)率和總彗星長(zhǎng)度與對(duì)照組相比，差異極顯著(P<0.01)，而各添加組問(wèn)的差異不顯著(P