牙本質(zhì)粘結(jié)混合層仿生再礦化的體外研究.pdf

1、研究背景：
　　 樹脂粘結(jié)中單體和水替換不理想造成樹脂浸潤粘結(jié)界面不徹底，影響牙本質(zhì)復(fù)合樹脂的長期效果，為避免這種“未完全樹脂浸潤層”導(dǎo)致的“納米滲漏”，學(xué)者們的研究主要集中于裸露膠原纖維的再礦化，利用兩種牙本質(zhì)非膠原蛋白仿生類似物，來改善牙本質(zhì)混合層的再礦化。
　　 目的：
　　 探討采用雙仿生類似物聚乙烯磷酸和聚丙烯酸影響3種粘結(jié)劑：Fluoro-BondⅡ(FL，Shofu，日本)；xenoⅢ(xeno，D

2、entsply，德國)和iBond(ib，Heracus，德國)和牙本質(zhì)所形成的樣本樹脂-牙本質(zhì)界面再礦化程度，比較樣本浸泡在模擬體液或再礦化液1，2，3和4個月后牙本質(zhì)粘結(jié)界面的再礦化程度評價參數(shù)的差異。
　　 方法：
　　 1.實驗分組和樣本制備
　　 將96顆健康前磨牙按照FL、xenoⅢ和iBond粘結(jié)劑隨機(jī)分為3組，每組32顆。每顆牙均暴露表層牙本質(zhì)，600目SiC水砂紙濕性打磨牙本質(zhì)表面，3種粘結(jié)劑分

3、別嚴(yán)格按照各自產(chǎn)品說明書處理牙本質(zhì)表面，牙合面堆制樹脂厚4-5mm，每顆牙沿牙合-齦向切成0.9mm厚的薄片，獲取中間兩片樣本用于礦化組和模擬組。礦化組采用含聚乙烯磷酸和聚丙烯酸的再礦化液漫泡，模擬組采用不含聚乙烯磷酸和聚丙烯酸的模擬體液浸泡。各材料觀察時間分別為1，2，3和4個月。
　　 2.再礦化液的準(zhǔn)備和樣本保存條件
　　 模擬體液配制：同參考文獻(xiàn)(Kokubo等，1990)；再礦化液配制：同參考文獻(xiàn)(Tay FR

4、，Pashley DH，2008)。礦化組浸泡在裝有約1g硅酸鹽水泥和15ml再礦化液的密封瓶內(nèi)，模擬組浸泡在裝有約1g硅酸鹽水泥和15ml模擬體液的密封瓶內(nèi)，37℃恒溫箱條件下各組標(biāo)本在儲存1、2、3和4個月后各取出8片。
　　 3.激光共聚焦顯微鏡(Confocal laser scanning microscopy，CLSM)
　　 以新鮮配制的0.1mmol/L蘇丹明B熒光染料對樣本染色24h，沖洗，吹干，置CL

5、SM下觀察滲入混合層的熒光情況，實驗前后均保持參數(shù)不變。通過計算機(jī)成圖并由Image-Pro-Plus6.0軟件測量熒光面積(Area of Fluorescence，A)、平均熒光量(Average Fluorescence，AF)及總熒光量(Total Fluorescence，TF)。
　　 4.統(tǒng)計學(xué)方法
　　 比較各組數(shù)據(jù)來評價仿生類似物對“未完全樹脂浸潤”混合層再礦化的效應(yīng)，以及在不同粘結(jié)劑組別和時間上的差異

6、。統(tǒng)計方法采用One-way ANOVA(Tukey HSD)檢驗方法。結(jié)果使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.CLSM照片定量分析
　　 含雙仿生類似物再礦化液對各組樣本在不同浸泡時間的仿生再礦化效應(yīng)通過粘結(jié)界面的熒光面積的改變來體現(xiàn)。
　　 FL粘結(jié)劑模擬組在模擬體液中浸泡1-4個月粘結(jié)界面的熒光面積均保持一致，無顯著性差異(P>0.05)；礦化組在再礦化體液浸泡1-3個月粘結(jié)

7、界面的熒光面積分別與浸泡同期模擬組相比均未出現(xiàn)顯著差異(P>0.05)，直到第4個月該值才出現(xiàn)顯著性降低(P<0.05)，提示FL粘結(jié)界面在再礦化液中作用4個月時出現(xiàn)再礦化現(xiàn)象。
　　 xenoⅢ粘結(jié)劑模擬組在模擬體液中浸泡第2個月即出現(xiàn)熒光面積增大(P<0.05)，并在第3-4個月維持相似的熒光面積，提示xenoⅢ粘結(jié)劑在粘結(jié)后2個月即出現(xiàn)膠原降解或者基底礦物質(zhì)去礦化現(xiàn)象；礦化組粘結(jié)界面在整個浸泡期維持相似的熒光面積(P>0.

8、05)，并不隨浸泡時間變化而變化，只能說明再礦化液浸泡能夠起到抵制基底礦物繼續(xù)丟失或阻止膠原降解的作用。
　　 ibond粘結(jié)劑模擬組在模擬體液中浸泡1-4個月粘結(jié)界面的熒光面積無明顯變化(P>0.05)；礦化組在再礦化液浸泡2個月后即出現(xiàn)熒光面積顯著下降(P<0.05)，并持續(xù)至第3個月達(dá)到最小熒光面積，到第4個月時又重新回到第2個月水平，可見其混合層再礦化現(xiàn)象有著一定的自限性。
　　 2.CLSM照片定性分析

9、　　 FL粘結(jié)劑模擬組在模擬體液浸泡1-4個月CLSM照片，顯示整個混合層沒有發(fā)生再礦化，很容易觀察到浸潤蘇丹明B貫穿混合層全層，厚約20-30μm。FL粘結(jié)劑礦化組在再礦化液浸泡1-3個月CLSM照片亦可見整個混合層浸潤蘇丹明B，厚約25-30μm；浸泡第4個月時，顯示蘇丹明B浸潤的混合層厚約15μm，熒光沒有貫穿全層，混合層中低部出現(xiàn)兩條長約5μm的窄熒光減弱帶，提示該區(qū)域發(fā)生礦物的再沉積。
　　 xenoⅢ粘結(jié)劑模擬組在

10、模擬體液浸泡1個月CLSM照片，顯示整個厚約7μm混合層沒有發(fā)生再礦化；在模擬體液浸泡第2，3，4個月CLSM照片，可見整個混合層無再礦化發(fā)生呈現(xiàn)紅色均一熒光條帶，厚約10μm，較第1個月厚度顯著增加。xenoⅢ粘結(jié)劑礦化組在再礦化液浸泡1-4個月CLSM照片，可見浸潤蘇丹明B的紅色熒光條帶厚度較一致，約8μm。
　　 ibond粘結(jié)劑模擬組在模擬體液浸泡1-4個月CLSM照片，顯示混合層浸潤蘇丹明B并貫穿全層，厚度基本一致，約

11、20-30μm。ibond礦化組在再礦化液浸泡1個月CLSM照片，可見整個厚約30μm的混合層浸潤蘇丹明B；在再礦化液浸泡第2個月CLSM照片，混合層厚度不一約25-30μm，觀察到混合層中部和底部出現(xiàn)若干處明顯的熒光減弱區(qū)，其厚度約為混合層厚度的1/2，長度幾乎為鏡下可見混合層的全長；在再礦化液浸泡第3個月CLSM照片，顯示厚約30μm的混合層浸潤蘇丹明B，但明暗不一，可見混合層中部數(shù)處大小不一、形狀不規(guī)則的熒光減弱區(qū)，面積分布范圍在

12、10-80μm2；在再礦化液浸泡4個月CLSM照片，混合層厚約25μm，底部浸潤蘇丹明B熒光染料，而上部約10μm×80μm的區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)明顯的熒光減弱區(qū)，甚至幾近穿透混合層表層，提示該區(qū)域發(fā)生了不同程度的礦物再沉積。
　　 結(jié)論：
　　 聚丙烯酸和聚乙烯磷酸雙仿生類似物分子對FL、xenoⅢ及ibond粘結(jié)劑均顯示不同程度的再礦化效應(yīng)，其中對ibond粘結(jié)劑再礦化效應(yīng)最明顯，出現(xiàn)時間也最早；對FL粘結(jié)劑再礦化效應(yīng)次之，但