RMP在60Coγ-射線誘導的肝癌細胞DNA修復中的作用.pdf

1、目的：
　　研究肝癌細胞抵抗60Coγ-射線引起的凋亡的機制，探索RMP在肝癌細胞抵抗60Coγ-射線引起的DNA損傷程度中的影響，分析RMP在肝癌細胞抵抗輻射引起的DNA損傷和凋亡的作用機制
　　方法：
　　1.流式細胞術確認肝癌細胞（7721、HepG2）與正常肝細胞（7702、L02）在抵抗60Coγ-射線損傷引起的凋亡方面的差異。
　　2.運用彗星電泳檢測肝癌細胞（7721、HepG2）與正常肝細胞（77

2、02、L02）在60Coγ-射線處理后不同時間點的損傷和修復
　　3.以γH2AX作為指標，用免疫熒光法檢測肝癌細胞與正常肝細胞在不同時間點的損傷程度從而確認上述結(jié)果。
　　4.利用qRT-PCR技術檢測不同時間點各個細胞中的RMP的野生型表達。
　　5.在肝癌細胞7721細胞中通過瞬轉(zhuǎn)RMP后，利用彗星電泳技術以及免疫熒光技術檢測不同時間點的損傷和修復
　　6.在正常肝細胞7702細胞中通過瞬轉(zhuǎn)不同的質(zhì)粒進入到

3、細胞中改變7702細胞的RMP表達，利用彗星電泳技術檢測不同時間點的損傷修復
　　結(jié)果：
　　1.凋亡結(jié)果顯示肝癌細胞（7721、HepG2）在60Coγ-射線處理后早期凋亡的出現(xiàn)比正常肝細胞（7702、L02）要晚，而且凋亡的程度要低于正常肝細胞。證明肝癌細胞要比正常肝細胞對γ-射線引起的凋亡更不敏感。
　　2.彗星電泳技術檢測出的結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝癌細胞與正常肝細胞在開始的時候的損傷差別并不大，但是在30min-1h時肝癌

4、細胞（7721、HepG2）的損傷修復速度要快于正常肝細胞（7702、L02）,且修復后損傷程度較后者要低。
　　3.免疫熒光的結(jié)果顯示肝癌細胞（7721）與正常肝細胞（7702）在損傷細胞數(shù)占總細胞數(shù)比例上的無差異，但是在每個細胞中的DNA損傷程度有差異，肝癌細胞的每個細胞中的γH2AX點平均在1h左右降低到比較低的值，比正常肝細胞要快且同一時間點γH2AX的點數(shù)要低于正常肝細胞，這與彗星電泳的結(jié)果相符，進一步證明了損傷修復的結(jié)

5、果可靠性。
　　4.qRT-PCR結(jié)果顯示在1h肝癌細胞中的RMP表達量升到最高，正常肝細胞中的RMP表達無明顯變化。
　　5.發(fā)現(xiàn)彗星電泳檢測到的肝癌細胞中的DNA的修復速度較之前更快，而且相同時間點檢測到的DNA損傷程度，過表達RMP的7721-O瞬轉(zhuǎn)細胞系要低于對照組7702細胞系。干擾RMP后發(fā)現(xiàn)瞬轉(zhuǎn)了干擾質(zhì)粒的7721-RI瞬轉(zhuǎn)細胞系的DNA修復過程受到阻礙，免疫熒光技術檢測到的γH2AX指標顯示的結(jié)果顯示RMP能

6、增強肝癌細胞的損傷修復速度，這與彗星電泳檢測的結(jié)果相符。qRT-PCR顯示各質(zhì)粒在細胞中得到了預期的表達。
　　6.RMP的表達量變化對于正常肝細胞7702細胞的DNA修復能力沒有明顯的影響。
　　結(jié)論：
　　本課題發(fā)現(xiàn)RMP的表達和肝癌細胞的DNA的損傷修復有著明顯的線性關系， RMP能夠促進肝癌細胞的 DNA損傷修復，但是在正常肝細胞中卻沒有顯示出促進DNA修復的結(jié)果。且肝癌細胞的野生型表達也顯示出了抑制凋亡的結(jié)果