胸腺肽α-,1-對(duì)肝硬化大鼠腸細(xì)菌轉(zhuǎn)位及小腸Toll-like Receptor 4表達(dá)的影響.pdf

1、肝硬化是當(dāng)前嚴(yán)重影響人類健康的疾病之一，并發(fā)癥有消化道出血、肝性腦病、肝細(xì)胞肝癌和感染等。肝硬化患者有自發(fā)性腹膜炎、菌血癥等嚴(yán)重感染的易感性，腸道細(xì)菌轉(zhuǎn)位是自發(fā)性腹膜炎主要細(xì)菌來(lái)源。肝硬化腸細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)、肝臟單核巨噬細(xì)胞功能低下、血清及腹水調(diào)理素水平下降、腸粘膜屏障受損通透性增加等都可促進(jìn)腸細(xì)菌轉(zhuǎn)位的發(fā)生。而腸細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)和腸細(xì)菌轉(zhuǎn)位又可以通過(guò)內(nèi)毒素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑誘導(dǎo)一系列的細(xì)胞因子產(chǎn)生，進(jìn)一步加重肝臟的損害。 腸粘膜可迅速識(shí)別腸

2、腔內(nèi)有害病原體并啟動(dòng)機(jī)體的免疫反應(yīng)，模式識(shí)別受體在免疫系統(tǒng)識(shí)別“自己”和細(xì)菌性“非己”成分方面起著非常重要的作用。Toll樣受體包括一些跨膜模式識(shí)別受體，在細(xì)菌或細(xì)菌成分識(shí)別、誘導(dǎo)抗菌基因表達(dá)和調(diào)節(jié)獲得性免疫反應(yīng)方面起著關(guān)鍵作用。 到目前為止，哺乳動(dòng)物TLRs共發(fā)現(xiàn)12種I型跨膜蛋白受體，誘生性或組成性TLRs表達(dá)于整個(gè)胃腸道各種類型細(xì)胞上，包括成熟和未成熟的胃腸粘膜上皮細(xì)胞，腸粘膜固有層的單核巨噬細(xì)胞、樹突樣細(xì)胞，腸粘膜下層的

3、肌纖維母細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等。 控制腸道細(xì)菌轉(zhuǎn)位可明顯減少肝硬化患者發(fā)生自發(fā)性腹膜炎的機(jī)會(huì)，選擇性腸道細(xì)菌清除、抗氧化劑、食物中添加鎢制劑、乳果糖、西沙比利、免疫調(diào)節(jié)劑等，能顯著降低腸細(xì)菌轉(zhuǎn)位的發(fā)生率。 胸腺肽α1作為一種免疫調(diào)節(jié)劑已經(jīng)用于多種疾病的治療，如慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、腫瘤等。據(jù)報(bào)道胸腺肽αl有抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用。本研究的目的是評(píng)價(jià)胸腺肽α1對(duì)肝硬化大鼠腸細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)、細(xì)菌轉(zhuǎn)位的影響以及胸腺肽α】可能

4、存在的肝臟保護(hù)作用；通過(guò)對(duì)TLR4在肝硬化大鼠腸道表達(dá)的研究，了解肝硬化大鼠腸道TLR4表達(dá)與腸道細(xì)菌免疫的關(guān)系。 方法:采用用皮下注射四氯化碳橄欖油溶液聯(lián)合戊巴比妥飲水的方法誘導(dǎo)肝硬化大鼠模型。于第7周開始將模型大鼠分為兩組：干預(yù)組和模型組，其中干預(yù)組大鼠用胸腺肽αl進(jìn)行干預(yù)。第9周末留取標(biāo)本。取小腸內(nèi)容物稀釋后接種于麥康凱瓊脂平板在微需氧環(huán)境、36．9~C溫箱里培養(yǎng)24-48h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。取肝、脾、腸系膜淋巴結(jié)組織少許制

5、成勻漿后接種于麥康凱瓊脂平板在微需氧環(huán)境、36．9℃溫箱里培養(yǎng)24-48h，進(jìn)行陽(yáng)性率計(jì)數(shù)，并進(jìn)行細(xì)菌定性分類。大鼠血清進(jìn)行生化檢測(cè)。肝臟病理HE染色和網(wǎng)染，進(jìn)行肝臟炎癥分級(jí)、纖維化分期檢查。大鼠小腸進(jìn)行TLR4免疫組織化學(xué)染色，計(jì)算陽(yáng)性面積百分比。小腸組織總RNA抽提，調(diào)整總RNA濃度后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄、PCR擴(kuò)增，電泳，與β．a(chǎn)cin內(nèi)參進(jìn)行條帶灰度比較。 結(jié)果:肝硬化制模大鼠總存活率為83％。模型組大鼠肝臟病理炎癥分級(jí)、纖維化分

6、期平均秩次明顯高于干預(yù)組大鼠，該組大鼠血清ALT、AST也明顯高于干預(yù)組和正常對(duì)照組大鼠。模型組大鼠小腸細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)、腸細(xì)菌轉(zhuǎn)位發(fā)生率高于干預(yù)組大鼠。小腸TLR4免疫組化染色各組均有陽(yáng)性表達(dá)，模型組陽(yáng)性表達(dá)平均秩次高于干預(yù)組，干預(yù)組高于正常對(duì)照組。RT-PCR研究也有同樣的發(fā)現(xiàn)。 結(jié)論: 1．肝硬化大鼠存在腸道細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)和細(xì)菌轉(zhuǎn)位。 2．肝臟損害的程度與腸道細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)和細(xì)菌轉(zhuǎn)位有相關(guān)性；肝臟損害愈嚴(yán)重，腸細(xì)菌