天然胸腺肽α-,1-的純化策略研究.pdf

1、Tα1是一種具有多種生物學(xué)活性的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)因子，具有抗病毒、殺傷腫瘤細(xì)胞和增強(qiáng)機(jī)體免疫等功能，已在臨床治療慢性病毒性肝炎、癌癥等疾病中得到了廣泛應(yīng)用，臨床價(jià)值極高。其制備方法主要有三種：組織提取、人工合成與基因重組。人工合成的Tα1氨基酸序列與天然Tα1的完全一致，但其生產(chǎn)成本昂貴，且會(huì)造成環(huán)境污染，近年來，國(guó)外進(jìn)口人工合成的Tα1售價(jià)高達(dá)900元/1.6mg，目前有所降低，很多患者沒有經(jīng)濟(jì)能力使用此種Tα1?；蛑亟M的方法尚很難實(shí)現(xiàn)

2、直接表達(dá)，多采用構(gòu)建Tα1多串體基因，實(shí)現(xiàn)Tα1與其他蛋白(如硫氧還蛋白、核糖體蛋白等)的融合表達(dá)。為了得到Tα1的單體，再使用化學(xué)裂解的方法，如用溴化氫、羥胺裂解，而裂解劑都有較強(qiáng)的毒性，如果大規(guī)模生產(chǎn)，會(huì)造成環(huán)境污染、操作人員的損傷以及有害化合物殘留等的不利影響?；蛑亟MTα1目前只處于臨床試驗(yàn)階段，還沒有進(jìn)入臨床應(yīng)用。組織提取天然Tα1較前兩種方法存在一定的優(yōu)勢(shì)，如售價(jià)低，生產(chǎn)過程無環(huán)境污染，更重要的是具有天然活性，對(duì)機(jī)體相容性好

3、，臨床應(yīng)用安全。但存在的問題是，目前國(guó)內(nèi)市售的多是從豬、小牛胸腺中提取的胸腺肽粗品，內(nèi)含多種混合成分和致敏性蛋白，Tα1的含量極低(一般小于0.6～1％)，分離純化困難。本文旨在研究利用組織提取的方法獲得純度較高的Tα1。本研究分為兩個(gè)方案，方案一為：使用市售組織提取的胸腺肽粗品，利用HPLC檢測(cè)其中Tα1的含量(約為0.31％)，然后利用陰離子交換層析的方法分離純化，經(jīng)HPLC檢測(cè)Tα1含量為7％左右，提高了23倍多。方案二為：新生小

4、牛胸腺，用提取小分子量多肽的低PH制備方法提取Tα1，經(jīng)HPLC檢測(cè)，Tα1純度達(dá)到了約6.7％，大大高于市售胸腺肽粗品中Tα1的含量；然后根據(jù)Tα1的理化性質(zhì)(等電點(diǎn)為4.2，分子量為3.108KD)，采用等電點(diǎn)沉淀和陰離子交換以及二者相結(jié)合的方法分離純化Tα1，Tα1的純度分別達(dá)到：12.96％、9.61％和14.46％。以上兩種方案均達(dá)到了較大程度提高組織提取Tα1純度的目的，方案二較方案一得到的Tα1純度要高出很多，且操作工藝簡(jiǎn)