辣椒WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因CaRKNIF1的克隆及表達分析.pdf

1、WRKY蛋白是一類在植物中具有重要作用的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，其成員參與了植物的生長、發(fā)育、代謝，以及對生物或非生物脅迫應(yīng)答的反應(yīng)。為了研究WRKY轉(zhuǎn)錄因子在辣椒上的功能，從辣椒cDNA中克隆了WRKY轉(zhuǎn)錄因子CaRKNIF1基因，并對其編碼蛋白的氨基酸序列、基因組中的拷貝數(shù)、內(nèi)含子等基因結(jié)構(gòu)特性，及其表達特性等進行了分析。主要研究結(jié)果如下： 1.以辣椒品種HDA149為材料，接種南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲，利用所設(shè)計的簡并引物，通過同源克隆

2、法獲得4個辣椒WRKY基因片段，采用RACE技術(shù)克隆了CaRKNIF1基因的cDNA全長序列。CaRKNIF1基因全長2，139bp，包含1，473bp的開放閱讀框，編碼一個含490個氨基酸殘基的蛋白，預(yù)測蛋白分子量大約是53.6KDa，等電點8.09，GenBank登錄號為DQ180348。 2.以辣椒基因組為材料，設(shè)計CaRKNIF1基因的全長引物，進行PCR擴增，結(jié)果表明CaRKNIF1基因無內(nèi)含子存在。根據(jù)CaRKNIF

3、1基因序列設(shè)計引物(不含WRKY保守區(qū))，PCR擴增產(chǎn)物進行地高辛標記，獲得探針。辣椒基因組DNA用EcoRI、EcoRV、BamHI三種限制性內(nèi)切酶消化，進行Southern雜交，結(jié)果表明CaRKNIF1基因以多拷貝的形式存在于植物體內(nèi)。 3.生物信息學(xué)分析表明，辣椒CaRKNIF1轉(zhuǎn)錄因子的氨基酸序列含有兩個保守的WRKY結(jié)構(gòu)域，屬于第Ⅰ組WRKY轉(zhuǎn)錄因子；CaRKNIF1蛋白可能定位于細胞核內(nèi)；預(yù)測了該蛋白的二級結(jié)構(gòu)、三級