水稻W(wǎng)RKY轉(zhuǎn)錄因子SUSIRI的原核表達(dá)及其靶基因的初步篩選.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文水稻W(wǎng)RKY轉(zhuǎn)錄因子SUSIRI的原核表達(dá)及其靶基因的初步篩選姓名：連肖華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：陳堅(jiān)20100401福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractTranscriptionfactorsareproteinthatplay柚importantroleintheregulationofplantgrowthanddevelopment，鸛well雒plantresponsetoen

2、vironmentTllcyususllycontainsaDNAbindingdomain，atranscriptionregulationdomain，anoligomerizationsiteandancleaarlocalizationsignalTranscriptionfactorsregulatetheexpressionoftargetgenensbybindingtotheciselementsintheregulat

3、orysequenceofthegenewithspecialproteinfunctionaldomainWRKYproteinsareoneoftheimportanttranscriptionfactorsinplants，whieninvolvedingrowth、development、metabolismandbioticorabioticstressresponsesoftheplantInthispapertheSUSI

4、RIgeneaWRKYfamiliygenethatWaSclonedfromtheOryzasa療vasubJaponicavatNipponbare，hasbeenstudiedinaimtoclarifiyitsbiologicalfunctionfromthefollowingthreeaspects：1、BasedonnucleotidesequenceoftheclonedSUSIRlgene，thestructureand

5、functionsofitspredictedproteinwereanalyzedbybioinformaticstoolsincludingitsconserveddomain、Subcellularlocalization、putativefunctionsandSOonFurthermoretheflurescenccexpressionvectorofpNSUGFPdrivenbyacfinpromoterWasconstru

6、ctedbyfusingtheSUSIRIgeneandGFPgeneandWasusedtotransformintoepidermiscellofonionbyGenegun，theresultindicatedthattheSUSIRIproteincouldbelocalizedinnucleolus2、BothPETSUandPQESUprocaryoticexpressionvectorwereconstructedbyin

7、sertingtheSUSIRlgeneintothePET28aandPQE30vectorrespectivelyAfteradditionwithIPTG，a63kDtargetedproteinWaSobservedtoexpressinPETSU／BL21(DEJ)plysScombinationandtheexpressionofSUSIRIproteinmaximizedin23hafterIPTGinductionThe

8、resultindicatedthattheWRKYproteinSUSIRICanbeobtainedbyprocaryoticexpression，buttheexpressedamountWaSSOlittlethatitWasonlydetectedbywesternblotinginsteadofbyCoomassiebrilliantbluestaining3、Byuseofthepulldownmethodforisola

9、tingthetargetgenesbindingtoSUSIRIproteinfromthetotalDNAofrice，thelysateofEcoliwhichcontainingexpressedSUSIRIproteinWasappliedtocatchtheDNAtargetandtheobtained21fragmentsweresequencedBasedonblastinNCBI，GramenedatabaseandP

10、LACEdatabase，thesesequenceswereidentifiedtobePhotosystemIP700chlorophyllaapoproteinA1gene、ChloroplaStenvelopemembraneproteingene、TransposonproteingeneandsomeunknownproteingenesThereWere16nucleotidesequencescontainingtheC

11、OreelementofWbox，with13ofthemcontainWboxelementand5ofthemcontainingsugarresponsiveelementAlltheseelementsaretheknowntargetingsitesofmostreportedWRKYfamilytranscriptionalfactorsKeywords：Oryzasativa；WRKYtranscriptionfactor

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