腸缺血再灌注肝肺損傷機制及鼠尾草酚保護作用的研究.pdf

1、本研究采用大鼠腸缺血再灌注模型，探討肝肺損傷的機制以及鼠尾草酚預處理對肝肺損傷的保護作用，為腸缺血多臟器損傷保護提供一種有效可靠的預處理藥物和方法，也為迷迭香的開發(fā)提供更有利的依據(jù)。 第一部分：NFκB在大鼠腸缺血再灌注肝肺損傷發(fā)病機制中的作用目的：探討NFκB在腸缺血再灌注肝肺損傷發(fā)病機制中的作用及其脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)對P-選擇素(P-selectin)、細胞間粘附分子-1(ICAM-1)的表達和中性粒細胞浸潤

2、的影響。 方法：Wistar大鼠24只隨機分成對照組(Control組)、腸缺血再灌注組(I/R組)和PDTC治療組(PDTC組)，每組8只。I/R和PDTC組大鼠行腸系膜上動脈夾閉1小時再灌注2小時。PDTC組于缺血前1小時給予PDTC100mg/kg腹腔注射。觀察肝肺組織病理學、肝功能、肺組織干濕比及支氣管肺泡灌洗蛋白(bronchiaalveoluslavagefluidprotein，BALFP)含量的變化，檢測血清腫瘤

3、壞死因子α(Tumornecrosisfactorα，TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)，肝肺組織勻漿超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和髓過氧化物酶(MPO)水平。免疫組化法觀察肝肺組織ICAM-1、P-selectin和NFκB表達并采用Westernblot法檢測肝肺組織ICAM-1及NFκB的水平。 結(jié)論：腸缺血1小時再灌注2小時誘發(fā)了肝肺組織損傷和全身系統(tǒng)的炎癥反應。肝肺組織有明顯的出血、滲出、中性粒細胞浸

4、潤和ICAM-1及P-selectin的表達增強，其與肝肺組織的NFκB表達相平行，說明NFκB的活化在腸缺血再灌注肝肺損傷過程中起重要作用。PDTC通過抑制NFκB活性對腸缺血再灌注肝損傷起保護作用。 第二部分：蛋白酶體在大鼠腸缺血再灌注肝肺損傷發(fā)病機制中的作用目的：探討蛋白酶體在腸缺血再灌注肝肺損傷發(fā)病中的作用以及蛋白酶體抑制劑乳孢素對蛋白酶體活性、炎癥信號傳導通路的影響。 方法：Wistar大鼠32只隨機分成對照組

5、(Control組)、腸缺血再灌注組(I/R組)、0.2mg/kg乳孢素預處理組(0.2mg/kg組)和0.6mg/kg乳孢素預處理組(0.6mg/kg組)，每組8只。I/R組、0.2mg/kg組和0.6mg/kg組大鼠行腸系膜上動脈夾閉1小時再灌注4小時，預處理組于術(shù)前1小時分別給予0.2mg/kg和0.6mg/kg乳孢素行腹腔注射。對照組及I/R組給予等量生理鹽水。觀察大鼠腸、肝、肺組織病理學、肝功能(AST、ALT)、肺組織含水率

6、和血清CK-B活性，檢測白細胞蛋白酶體20S的活性和血清TNF-α水平，測定腸、肝、肺組織勻漿MPO水平。采用免疫組化法觀察肝肺組織ICAM-1和NFκB表達并用Westernblot法檢測其含量。 結(jié)論：腸缺血1小時再灌注4小時引起肝肺損傷，其程度與血清TNF-α水平及NFκB的表達相平行，NFκB參與了這一損傷過程。使用蛋白酶體抑制劑乳孢素有效地降低了白細胞蛋白酶體20S的活性，同時減輕了(1)腸道缺血引起的腸肝肺損傷；(2)

7、腸、肝、肺組織的白細胞侵潤；(3)降低血漿TNF-α水平；(4)降低肝肺組織ICAM-1和NFκBp65的蛋白表達。蛋白酶體在腸缺血再灌注肝肺損傷炎癥調(diào)解信號轉(zhuǎn)導的通路中發(fā)揮了重要的作用，為蛋白酶體抑制劑在臨床上的應用供了依據(jù)。 第三部分：鼠尾草酚對腸缺血再灌注肝肺損傷的保護作用 目的：探討鼠尾草酚(carnosol)預處理對大鼠腸道缺血再灌注肝肺損傷的保護作用，為腸缺血再灌注肝肺損傷的保護提供一種有效可靠的預處理藥物和

8、方法，為迷迭香的開發(fā)提供更有利的依據(jù)。 方法：雄性Wistar大鼠42只，隨機分為7組(n=6)：對照組(control組)、腸缺血1小時再灌注2小時組(I/R2組)、再灌注4小時組(I/R4組)、再灌注6小時組(I/R6組)以及相應缺血再灌注鼠尾草酚預處理組(分別為：Carnorsol2組、carnosol4組、carnorsol6組)。大鼠10﹪水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉后，上腹正中切口入腹，control組大鼠剖

9、腹后分離腸系膜上動脈但不結(jié)扎；I/R組采用Megison法制作腸缺血再灌注模型，分離并結(jié)扎腸系膜上動脈1小時按照分組情況分別再灌注2、4和6小時；Carnosol預處理組手術(shù)操作同I/R組，術(shù)前1小時給予carnorsol3mg/kg腹腔注射。對照組和I/R組給予等量10﹪二甲基亞砜。分別進行肝肺組織的病理學、肝臟功能和肺泡BALFP的測定。測定血清IL-6水平、肝肺組織SOD和MPO活性。同時采用免疫組化法和Westernblot法進