低分子肝素對(duì)大鼠肺纖維化干預(yù)機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察低分子肝素對(duì)博萊霉素誘發(fā)的大鼠肺纖維化模型的治療作用，通過比較正常對(duì)照組、模型組、激素組和低分子肝素組大鼠肺組織中的羥脯氨酸(HYP)和酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF)、血清及肺泡灌洗液中的(transforming growth factor-β1，TGF-β1)的水平，來(lái)探討低分子肝素治療肺纖維化的可能作用機(jī)制，為臨床低分子肝素治療肺纖維化患者提供理論支持。 方法： 選取120，口、雄性SD大鼠，適應(yīng)性飼

2、養(yǎng)一周后，隨機(jī)分成正常對(duì)照組(A組)、模型組(B組)、激素組(C組)、低分子肝素組(D組)。B組、C組、D組經(jīng)氣管內(nèi)一次性注入博萊霉素A<,5>(5mg/kg)制作大鼠肺纖維化模型，A組氣管內(nèi)一次性注入等量生理鹽水；C組肌肉注射地塞米松0.5mg/kg/d，D組皮下注射低分子肝素1000u/d，A組給予0.2ml生理鹽水皮下注射。各組大鼠分別于造模后1天、3天、7天、14天、28天留取肺組織、血清、肺泡灌洗液。取肺組織做HE、Masso

3、n染色和免疫組化方法測(cè)定肺組織中的。TGF-β<,1>、aFGF的陽(yáng)性面積比，并取肺組織測(cè)定肺組織膠原含量，取血清和肺泡灌洗液測(cè)定TGF-β<,1>含量。觀察低分子肝素治療肺纖維化的效果。 結(jié)果： 1、HE染色所見：正常對(duì)照組各時(shí)相點(diǎn)均未出現(xiàn)明顯的病理變化。模型組第l天肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)以巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞為主的急性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。第3天肺泡腔內(nèi)巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞滲出增多，肺泡間隔水腫增寬，肺泡炎加重。第7天肺泡腔

4、以慢性炎癥細(xì)胞為主，形成嚴(yán)重肺泡炎，成纖維細(xì)胞開始增生，毛細(xì)血管增生，病灶內(nèi)肺泡萎陷。第14天肺泡炎逐漸減輕，肺泡壁增厚，肺纖維組織合成增加。第28天大鼠肺組織炎癥減輕，成纖維細(xì)胞增多，膠原纖維明顯增多，形成灶狀纖維化，部分肺泡間隔明顯增寬。激素治療組和低分子肝素治療組肺泡間隔增寬較模型組明顯減輕，單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)較輕，肺泡結(jié)構(gòu)基本正常，纖維化的病理改變也較模型組明顯減輕。 2、Masson染色：正常對(duì)照組可見淡藍(lán)

5、色的基質(zhì)膠原較少。模型組基質(zhì)膠原隨造模時(shí)間延長(zhǎng)而明顯增多；激素治療組和低分子肝素治療組各時(shí)間相基質(zhì)膠原含量隨造模時(shí)間延長(zhǎng)而輕度升高，均較模型組有不同程度的減少。 3、肺組織羥脯氨酸(HYP)含量變化：第1天和第3天模型組和激素治療組、低分子肝素治療組肺組織HYP含量輕微高于正常對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，模型組HYP含量隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增高，而激素治療和低分子肝素治療組HYP含量呈低水平增高趨勢(shì)。7天、14天、2

6、8天激素治療和低分子肝素治療組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。各時(shí)相激素治療組HYP含量與低分子肝素治療組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，正常對(duì)照組各時(shí)相點(diǎn)方差分析無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4、大鼠TGF-β<,1>含量變化：血清及肺泡灌洗液中：3天、7天、14天、28天各時(shí)間點(diǎn)模型組血清TGF-β<,1>含量均較正常對(duì)照組、激素組及低分子肝素組明顯增高(P<0.01)，1天點(diǎn)模型組TGF-β<,1>含量稍高于

7、其它各組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；各時(shí)間點(diǎn)低分子肝素組血清TGF-β<,1>含量高于正常對(duì)照組(P<0.01)；激素組血清各時(shí)間點(diǎn)TGF-β<,1>含量與低分子肝素治療組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；.肺泡灌洗液與血清各時(shí)間點(diǎn)TGF-β<,1>含量變化一致。大鼠肺組織TGF-β<,1>蛋白表達(dá)：模型組大鼠TGF-β<,1>表達(dá)量高于正常對(duì)照組、激素組及低分子肝素組，第3-28天時(shí)間點(diǎn)與三組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；

8、低分子肝素組TGF-β<,1>表達(dá)量高于正常對(duì)照組，但與正常對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；正常對(duì)照組的少數(shù)支氣管粘膜上皮細(xì)胞的胞漿可發(fā)現(xiàn)少量TGF-β<,1>蛋白弱表達(dá)，也可偶見TGF-β<,1>弱陽(yáng)性的肺胞巨噬細(xì)胞。 5、大鼠肺組織aFGF含量的變化：第1、3天時(shí)間點(diǎn)正常組和低分子肝素組aFGF含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，模型組和激素組aFGF無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；正常組、低分子肝素組和模型組、激素組比

9、較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。第7、14、28天時(shí)間點(diǎn)，可以看到各組之間都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，其中模型組aFGF含量最高，以下依次為激素組、低分子肝素組、正常組。模型組表達(dá)aFGF的細(xì)胞數(shù)量最多，低分子肝素組僅在少量巨噬細(xì)胞中表達(dá)，正常組表達(dá)微量。 結(jié)論： 1、低分子肝素可以減輕大鼠肺纖維化程度。 2、TGF-β<,1>在肺纖維化的病理過程中起著重要作用。 3、aFGF含量和肺纖維化程度隨造模