動脈粥樣硬化NPC1L1基因的表達(dá)及V55L基因多態(tài)性研究.pdf

1、動脈粥樣硬化(As)是嚴(yán)重危害人們健康的一類疾病，在我國60歲以上人群中發(fā)病率高達(dá)79.9％，防治As成為醫(yī)學(xué)界共同關(guān)注的重要課題。動脈粥樣硬化與血脂代謝密切相關(guān)。目前已知高脂血癥和高膽固醇血癥是As的危險因素。特別是高膽固醇血癥危害極大。因此，干預(yù)膽固醇吸收或代謝途徑將有效防治As的發(fā)生和發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)Niemann-PickC1-Like1(NPC1L1)基因在腸腔膽固醇向腸上皮刷狀緣膜的攝取中扮演重要角色，NPCILl基因還是膽固

2、醇吸收抑制劑依澤替米貝(ezetimibe)作用的對象。腸內(nèi)膽固醇吸收特異性抑制劑是未來阻止動脈粥樣硬化和心血管疾病的重要藥物。 冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病，CHD)是一種多因素疾病，由環(huán)境因素和遺傳因素共同作用引起。目前的研究越來越多的致力于尋找CHD和某些基因多態(tài)性之間的關(guān)系，以期探求CHD的最終發(fā)病機制。脂質(zhì)代謝紊亂是致動脈粥樣硬化和冠心病發(fā)生的最重要的危險因素，目前關(guān)于影響脂質(zhì)代謝的基因多態(tài)性和冠心病之間的關(guān)系是研

3、究熱點。本研究通過檢測高脂血癥和動脈粥樣硬化大鼠小腸組織中NPCIL1mRNA表達(dá)，以期了解NPC1L1對血脂代謝和動脈粥樣硬化發(fā)生的關(guān)系；并通過研究V55L基因在冠心病脂質(zhì)代謝紊亂患者中的多態(tài)性，以其了解V55L在中國冠心病患者中是否存在多態(tài)性現(xiàn)象及其與血脂紊亂之間的關(guān)系。為進一步了解NPC1L1在血脂代謝和動脈粥樣硬化的作用奠定基礎(chǔ)。 對象和方法： 一、研究對象 1.健康清潔級雄性Wistar大鼠，體重(25

4、0±50)g，隨機分成3組，每組10只。分別復(fù)制單純高脂血癥和動脈粥樣硬化及正常普食對照大鼠模型 2.2005年5月-11月我院心血管內(nèi)科住院確診的冠心病患者，對照組是同期非心血管疾病的門診體檢和住院排除冠心病者。本研究共收集符合條件的冠心病患者129例及對照組107例，其中男性147例，女性89例，平均年齡41-72歲(56.1±12.6)歲。冠心病患者嚴(yán)格按照1981年全國冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)確定。129例患者中有27例行冠狀動脈

5、造影證實。 二、方法和指標(biāo) (一)動物實驗部分 1.采用高脂飼料復(fù)制單純高脂血癥大鼠模型；高脂飼料+腹腔注射VitD復(fù)制As大鼠模型；普通飼料喂養(yǎng)復(fù)制正常對照大鼠模型 2.病理檢測三組大鼠模型主動脈和冠狀動脈 3.血清生化檢測三組大鼠模型血脂指標(biāo) 4.半定量RT-PCR方法分別檢測三組大鼠模型小腸組織中NPC1L1mRNA的表達(dá) 5.統(tǒng)計學(xué)分析三組大鼠模型NPC1L1mRNA表達(dá)差

6、異 (二)臨床病人研究 1.血清生化檢測129例冠心病患者和107例對照組血脂指標(biāo) 2.PCR方法擴增236例臨床標(biāo)本目的基因 3.限制性內(nèi)切酶法酶切擴增目的基因NPC1L1 4.酶切產(chǎn)物進行DNA測序 三、實驗結(jié)果 (一)動物實驗部分 1.病理觀察結(jié)果：14周病理檢測見動脈粥樣硬化組大鼠動脈內(nèi)粥樣斑塊形成；單純高脂和正常普食組動脈無異常 2.生化檢測結(jié)果：14周血

7、清生化檢測動脈粥樣硬化組和單純高脂組大鼠TC、TG、LDL-C均明顯高于正常普食組大鼠、HDL-C低于正常普食組大鼠；而動脈粥樣硬化組和單純高脂組大鼠各指標(biāo)無明顯差異 3.基因表達(dá)分析：半定量RT-PCR方法檢測三個組別大鼠小腸組織中均存在NPC1L1mRNA基因表達(dá)；動脈粥樣硬化組和單純高脂血癥組大鼠小腸組織中NPC1L1 mRNA表達(dá)明顯高于正常對照大鼠(P＜0.05)；單純高脂飲食和動脈粥樣大鼠小腸組織中NPC1L

8、1mRNA表達(dá)之間無明顯差異(P＞0.05) (二)臨床病人研究 1.生化檢測結(jié)果：臨床血脂檢測冠心病組患者HDL-C指標(biāo)低于對照組；TG、TC、LDL-C、ApoA、ApoB無明顯差異 2.NPC1L1基因多態(tài)性分析：多聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片斷長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法檢測實驗人群NPC1L1基因V55L變異的三種基因型中，V55L無變異，均為VV型。 四、結(jié)論 (一)動物實驗部分

9、 1.采用高脂飼料+一次性腹腔注射VitD法可成功復(fù)制動脈粥樣硬化大鼠模型 2.動脈粥樣硬化組和單純高脂組大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C各指標(biāo)與正常普食組大鼠存在統(tǒng)計學(xué)差異；但動脈粥樣硬化組和單純高脂組大鼠各指標(biāo)無明顯差異 3.血脂代謝紊亂與小腸組織中NPC1L1的高表達(dá)有關(guān)，NPC1L1高表達(dá)促進了小腸組織膽固醇的吸收； 4.動脈粥樣硬化組NPC1L1表達(dá)較正常對照組增高；但與單純高脂組表達(dá)無顯著差