Notch-1信號(hào)通路與胰腺癌吉西他濱化療耐藥及胰腺癌臨床病理預(yù)后特征相關(guān)性的研究.pdf

1、目的:胰腺癌是消化系統(tǒng)中惡性程度較高、預(yù)后極差的腫瘤,其發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚未闡明。吉西他濱單藥或聯(lián)合應(yīng)用是目前中晚期胰腺癌綜合治療體系中的重要組成部分,然而吉西他濱化療耐藥始終成為胰腺癌治療效果不佳的主要原因之一。Notch信號(hào)通路被認(rèn)為在不同細(xì)胞中扮演著各種不同的“細(xì)胞命運(yùn)決定者”的角色,并發(fā)現(xiàn)參與了多種腫瘤化療耐藥的形成以及在腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。本研究擬探討Notch-1信號(hào)通路與胰腺癌吉西他濱化療耐藥之間的關(guān)系,以及Not

2、ch-1表達(dá)水平與胰腺癌臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后的關(guān)系。
　　 材料與方法:選用胰腺癌細(xì)胞株AsPC-1、BxPC-3、MIAPaCa-2作為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,Real-time PCR和Western blot檢測(cè)吉西他濱作用前后Notch-1信號(hào)通路表達(dá)水平變化。應(yīng)用γ分泌酶抑制劑、Notch-1 siRNA下調(diào)Notch-1信號(hào)通路以及轉(zhuǎn)染人Notch-1胞內(nèi)段(NICD)基因質(zhì)粒上調(diào)Notch-1信號(hào)通路活性,觀察干預(yù)前后吉西他濱

3、化療敏感性的變化。通過Annexin V/PI雙染法檢測(cè)凋亡、Caspase-3活性測(cè)定以及Westernblot檢測(cè)凋亡通路相關(guān)調(diào)控蛋白Bax、Bcl-2、Bcl-XL在阻斷Notch-1信號(hào)通路前后吉西他濱作用時(shí)表達(dá)水平的變化。同時(shí)收集北京協(xié)和醫(yī)院行手術(shù)治療的73例胰腺導(dǎo)管腺癌標(biāo)本,采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Notch-1在癌組織與癌旁組織中的表達(dá)情況并評(píng)價(jià)其與患者臨床病理以及預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:吉西他濱作用于胰腺

4、癌細(xì)胞時(shí)Notch-1信號(hào)通路被激活；阻斷Notch-1信號(hào)通路可使吉西他濱化療敏感性增加,而激活Notch-1信號(hào)通路可降低吉西他濱化療敏感性,促進(jìn)耐藥；阻斷Notch-1信號(hào)通路后吉西他濱作用時(shí)細(xì)胞凋亡率明顯增高,Caspase-3活性明顯增高,促凋亡蛋白Bax表達(dá)水平上調(diào),抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL表達(dá)水平下降。Notch-1在胰腺癌腫瘤中呈高表達(dá),并與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。Kaplan-Meier生存分析顯示Notch-1陽(yáng)性表