聯(lián)合鹽霉素和吉西他濱殺傷胰腺癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　 胰腺癌是惡性程度極高的消化系統(tǒng)腫瘤，其死亡率居于惡性腫瘤相關(guān)死亡的第四位。盡管近年來(lái)胰腺癌診治水平明顯提高，其5年生存率仍低于5％。吉西他濱是目前胰腺癌輔助化療的主要藥物，但其有效率并不高。多個(gè)Ⅲ期臨床試驗(yàn)嘗試吉西他濱聯(lián)合其他藥物治療胰腺癌，但同單藥相比并沒(méi)有取得更好的效果。近來(lái)有研究指出惡性腫瘤中有一小部分稱為腫瘤干細(xì)胞，它維系著腫瘤發(fā)生和發(fā)展。目前，已在多個(gè)實(shí)體瘤包括胰腺癌中發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞的存在。最新的研

2、究顯示，大部分實(shí)體瘤的化療耐藥至少部分同腫瘤干細(xì)胞有關(guān)。因此，尋找能夠靶向針對(duì)腫瘤干細(xì)胞的藥物可能最終提高腫瘤治療療效。鹽霉素，最初被用在反芻類家禽抗細(xì)菌、真菌及寄生蟲，近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)其可選擇性清除乳腺癌干細(xì)胞，故而，鹽霉素可能是靶向腫瘤干細(xì)胞，我們通過(guò)體內(nèi)外研究來(lái)探討鹽霉素單藥或聯(lián)合吉西他濱能否根除胰腺癌細(xì)胞。
　　 方法:
　　 (1)體外實(shí)驗(yàn)研究鹽霉素和吉西他濱對(duì)流式分選后的胰腺癌細(xì)胞毒作用
　　 1．自SW

3、1990和AsPC-1中，流式細(xì)胞術(shù)分選CD133+/CD133-和側(cè)群細(xì)胞(SidePopulation，SP)/非側(cè)群細(xì)胞(Non Side Population，NSP)細(xì)胞。
　　 2．MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)鹽霉素(Salinomycin，SAL)、吉西他濱(Gemcitabine，GEM)和藥物聯(lián)用(Combination，COM)對(duì)CD133+/CD133-和SP/NSP細(xì)胞增殖的影響。
　　 3．Annexin V

4、-FITC實(shí)驗(yàn)SAL、GEM和藥物聯(lián)用72h后，對(duì)CD133+/CD133-和SP/NSP細(xì)胞凋亡的影響。
　　 4．自SW1990中以CD133為標(biāo)記流式分選細(xì)胞后，SAL、GEM和藥物聯(lián)用72h后，觀察體外是否能抑制CD133+/CD133-細(xì)胞的平板克隆。進(jìn)一步行藥物作用后細(xì)胞的懸浮腫瘤球培養(yǎng)來(lái)進(jìn)一步檢測(cè)藥物對(duì)癌細(xì)胞自我更新能力的抑制。
　　 (2)藥物治療胰腺癌異移植瘤模型
　　 將自SW1990細(xì)胞流式

5、分選后的CD133+和CD133-細(xì)胞分別注射于裸鼠背部。
　　 待皮下腫瘤生長(zhǎng)至2-4mm時(shí)開(kāi)始給藥。分別腹腔注射：對(duì)照磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Saline，PBS)，GEM為100mg/kg，每周給藥2次，SAL為4mg/kg，隔日給藥,COM為2藥皆給。分別隔日測(cè)量并記錄裸鼠體重及皮下移植瘤的體積，共觀察25天。
　　 結(jié)果:
　　 1、胰腺癌細(xì)胞株SW1990，AsPC-1可通

6、過(guò)流式細(xì)胞術(shù)，以CD133及SP為標(biāo)記，分別分離出并鑒定為胰腺癌干細(xì)胞。
　　 2、隨著藥物濃度增加，單藥吉西他濱或鹽霉素分別殺傷胰腺癌干細(xì)胞和非干細(xì)胞，二者相比，吉西他濱對(duì)非干細(xì)胞殺傷更具效力，而鹽霉素對(duì)胰腺癌干細(xì)胞的殺傷效果顯著。
　　 3、聯(lián)合鹽霉素和吉西他濱對(duì)胰腺癌干細(xì)胞和非干細(xì)胞都有殺傷作用，且相比于單藥效果都顯著(P＜0.01)。
　　 4、鹽霉素僅對(duì)胰腺癌干細(xì)胞的克隆形成和腫瘤球形成抑制效果好，但聯(lián)

7、合鹽霉素和吉西他濱可清除胰腺癌干細(xì)胞及非干細(xì)胞的克隆形成及腫瘤球生長(zhǎng)（P＜0.01）。
　　 5、CD133+組中，SAL和GEM都可抑制腫瘤生長(zhǎng)，但僅聯(lián)合用藥有顯著性效果； GEM和聯(lián)合用藥都明顯抑制有CD133-細(xì)胞形成的腫瘤(P＜0.01)。在治療過(guò)程中，各組裸鼠體重?zé)o明顯差異。
　　 結(jié)論:
　　 鹽霉素可抑制胰腺癌干細(xì)胞生長(zhǎng)，且體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明，聯(lián)合鹽霉素和吉西他濱可明顯抑制胰腺癌干細(xì)胞和非干細(xì)胞。鹽霉素