“加味四君子湯”對(duì)增齡大鼠免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用及初步機(jī)制探討.pdf

1、目的：觀察中藥復(fù)方制劑“加味四君子湯”對(duì)增齡大鼠免疫系統(tǒng)功能的調(diào)節(jié)作用，研究其是否具有延緩炎性衰老的功效，并對(duì)可能的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　 方法:
　　 （1）選取50只12月齡健康Wistar大鼠，雌雄各半，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。隨機(jī)分為5組，即“加味四君子湯”（以下簡(jiǎn)稱藥物）低劑量組、中劑量組、高劑量組，陽(yáng)性對(duì)照組、老年對(duì)照組，每組各10只；另選取10只3月齡的Wistar大鼠作為青年對(duì)照組。
　　

2、（2）分別給予“加味四君子湯”1.6g/kg/d、3.2g/kg/d、6.4g/kg/d，“六味地黃丸”混懸液1.5g/kg/d，2ml蒸溜水灌胃，持續(xù)給藥90天。
　　 （3）稱量大鼠體重后處死，觀察試驗(yàn)大鼠以下指標(biāo)：各組大鼠體重(BW)；血清免疫球蛋白（IgG）水平；計(jì)算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)；將胸腺和脾臟組織進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)改變；用免疫組化法定位并半定量檢測(cè)胸腺白介素-2（IL-2）的表達(dá)情況及脾臟腫瘤壞死因

3、子-α（TNF-α）的表達(dá)情況；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)核因子-κB（NF-κBP56）mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 （1）各組大鼠體重變化：用藥前后比較，各組大鼠的體重均有增加；用藥后，藥物各組大鼠體重均較陽(yáng)性對(duì)照組、老年對(duì)照組無(wú)顯著性差異。
　　 （2）各組大鼠血清IgG水平的比較：與青年對(duì)照組相比較，增齡各組大鼠血清IgG水平均顯著降低(P<0.01)；與老年對(duì)照組相比較，藥物組的IgG水

4、平顯著升高(P<0.05，P<0.01)，陽(yáng)性對(duì)照組IgG水平顯著升高(P<0.01)；與陽(yáng)性對(duì)照組相比較，藥物組的IgG水平明顯降低(P<0.01)。
　　 （3）各組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的比較：與青年對(duì)照組相比較，增齡各組的胸腺和脾臟指數(shù)均顯著降低(P<0.01)；與老年對(duì)照組相比較，藥物組胸腺指數(shù)明顯升高(P<0.01)，脾臟指數(shù)無(wú)顯著性差異(P>0.05)，陽(yáng)性對(duì)照組胸腺指數(shù)變化無(wú)顯著性差異，脾臟指數(shù)變化無(wú)顯著性差異(

5、P>0.05)；藥物組和陽(yáng)性對(duì)照組脾臟指數(shù)差異不明顯，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 （4）各組大鼠胸腺、脾臟組織形態(tài)學(xué)比較：光鏡下，藥物組胸腺有不同程度的萎縮，與老年對(duì)照組相比胸腺組織被脂肪替代等病理變化程度降低，胸腺細(xì)胞分布較密，著色良好。與老年對(duì)照組相比較，藥物組脾臟的白髓和紅髓分界欠清晰，白髓略微增多，中性粒細(xì)胞數(shù)量增多，淋巴細(xì)胞排列比較疏松。
　　 （5）各組大鼠胸腺IL-2表達(dá)水平：與青年對(duì)照組相比較，

6、增齡各組大鼠胸腺IL-2表達(dá)水平均顯著降低(P<0.01)；與老年對(duì)照組相比較，藥物組胸腺IL-2表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)，陽(yáng)性對(duì)照組胸腺IL-2表達(dá)水平升高(P<0.01)；藥物組和陽(yáng)性對(duì)照組的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 （6）各組大鼠脾臟TNF-α表達(dá)水平：與青年對(duì)照組相比較，增齡各組大鼠脾臟TNF-α表達(dá)水平均明顯升高(P<0.01)；與老年對(duì)照組相比較，藥物組脾臟TNF-α表達(dá)水平降低(P<

7、0.01)，陽(yáng)性對(duì)照組脾臟TNF-α表達(dá)水平降低(P<0.01)；藥物組和陽(yáng)性對(duì)照組的脾臟TNF-α表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 （7）各組大鼠脾臟NF-κBP65mRNA表達(dá)水平：與老年對(duì)照組相比較，青年大鼠NF-κBp65mRNA的表達(dá)明顯升高(P<0.01)；陽(yáng)性對(duì)照組的NF-κBp65mRNA的表達(dá)明顯升高(P<0.05)，藥物各組NF-κBp65mRNA的表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P

8、<0.01)；與陽(yáng)性對(duì)照組相比較，藥物低劑量組NF-κBp65mRNA的表達(dá)升高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中、高劑量組的表達(dá)顯著升高(P<0.01)。
　　 結(jié)論:“加味四君子湯”在大鼠增齡過(guò)程中應(yīng)用，能夠升高老齡大鼠血清IgG含量，提高胸腺指數(shù)，對(duì)脾臟指數(shù)無(wú)明顯影響，提高胸腺IL-2的表達(dá)水平，降低脾臟TNF-α的表達(dá)水平，上調(diào)脾臟組織中NF-κBP65mRNA的表達(dá)，提示“加味四君子湯”可能通過(guò)調(diào)控NF-κB信號(hào)通