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文檔簡介
1、目的：蛋白激酶Cα（PKCα）參與尿濃縮功能的調(diào)節(jié)，但具體機制尚不清楚。本實驗研究PKCα對水通道蛋白2（aquaporin 2，AQP2）轉(zhuǎn)運和細胞骨架（cytoskeleton，CSK）的分布的作用。
方法：構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染AQP2-GFP融合蛋白的小鼠內(nèi)髓集合管上皮細胞（mIMCD3）株，采用免疫印跡技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率；體外培養(yǎng)AQP2-GFP mIMCD3細胞，使用脂質(zhì)體2000分別轉(zhuǎn)染PKCαshRNA質(zhì)粒、PKCα顯
2、性激活型質(zhì)粒（PKCαA25E）及PKCαscramble shRNA陰性對照質(zhì)粒，48h后收集部分細胞行免疫印跡檢測轉(zhuǎn)染效率，部分細胞使用去氨加壓素（DdAVP）刺激，分別收集刺激后0分鐘、30分鐘、以及DdAVP刺激30分鐘后洗脫2小時細胞，采用免疫熒光共聚焦技術(shù)檢測AQP2以及微管的分布變化。
結(jié)果：成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達AQP2-GFP的mIMCD3細胞株；使用PKCαshRNA轉(zhuǎn)染AQP2-mIMCD3細胞后，轉(zhuǎn)染組
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