天山馬鹿鹿茸血源ACE抑制肽的研究.pdf

1、高血壓是引發(fā)心血管疾病如心力衰竭、中風、冠心病和心肌梗塞的重要危險因子，已成為嚴重危害人類健康的主要疾病之一。ACE抑制劑作為有效的治療抗高血壓藥物而被廣泛的應(yīng)用于臨床。這些抑制劑主要是一些化學(xué)合成藥，在治療高血壓過程中，存在一定副作用如味覺障礙、血管水腫和干咳等。ACE抑制肽由于其安全性高，副作用小，易吸收，而成為生物活性肽研究領(lǐng)域的熱點。天山馬鹿鹿茸血內(nèi)含豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、各種免疫球蛋白和多種微量元素，還含有多糖、及各種酶類和維

2、生素。在這些蛋白質(zhì)中含有許多潛在的ACE抑制肽，通過選擇合適的酶解工藝，可以制備得到大量的ACE抑制肽。對天山馬鹿鹿茸血ACE抑制肽的研究拓寬了天山馬鹿鹿茸血的綜合利用途徑。
　　 本研究以天山馬鹿鹿茸血為原料，采用蛋白酶水解工藝制備天山馬鹿鹿茸血水解物。分別采用中性蛋白酶和堿性蛋白酶對天山馬鹿鹿茸血進行酶解，根據(jù)水解物ACE抑制活性的的強弱，選擇堿性蛋白酶Alcalase作為制備ACE抑制肽的水解酶。通過單因素試驗和正交試驗對

3、酶解工藝中的四個重要參數(shù)進行優(yōu)化，確定出堿性蛋白酶酶解的最佳工藝如下:底物濃度6%、加酶量40μl/g蛋白、pH8.0、溫度55℃。在該條件下進行天山馬鹿鹿茸血酶解3h，水解度為28.0%，ACE抑制率為93.55%。用分子篩層析柱Sephadex G-15對天山馬鹿鹿茸血的堿性蛋白酶Alcalase水解物進行分離純化，在如下分離條件下進行凝膠過濾分離取得較好的的分離效果:凝膠柱，1.8×60 cm；樣品濃度，50 mg/ml:上樣量，

4、1.5 ml；流速，0.4 ml/min；洗脫劑，0，02 mol/L HAc-NaAc緩沖液(pH4.0)。經(jīng)凝膠過濾制備的得到的ACE抑制肽組分，經(jīng)過兩次RP-HPLC后得到高純度的單一活性組分。該組分經(jīng)LC/MS鑒定，從天山馬鹿鹿茸血堿性蛋白酶Alcalase水解物中分離得到的一種新的ACE抑制肽Pro-Pro-Leu-Tyr(PPLY)，其IC50值為11.5μM。利用藥物設(shè)計軟件Insight Ⅱ建立PPLY的分子模型，將該分

5、子模型與ACE進行分子對接，得到PPLY在ACE中的結(jié)合部位包括Y62、N66、Y69、L140、E143、H353、A354、F359.Y360、K368、H383、E384、H387、F391、Y392、R402、G404、H410、E411、F512、H513、P519、R522和Y523殘基，該部位位于ACE的空腔內(nèi)，占據(jù)了ACE催化區(qū)域的大部分，其結(jié)合能為-31.9821kcal/mol，其中靜電作用能為-24.4872 kc