中國一個先天性無虹膜癥家系的臨床分析及其與PAX6基因的相關(guān)性研究.pdf

1、第一章中國一個先天性無虹膜癥家系的經(jīng)典遺傳學及臨床分析
　　 目的：分析中國一個先天性無虹膜家系的遺傳模式及其臨床特點。
　　 方法：將就診于中南大學湘雅二醫(yī)院門診的一個先天性無虹膜家系(ANL)進行詳細家系調(diào)查并繪制家系圖譜。對自愿參加研究的9名患者進行詳細病史采集及眼部檢查。4名可得到清晰黃斑光學相干斷層掃描(opticalcoherencetomography,OCT)圖像的患者采用儀器自動按黃斑9格分區(qū)分析視網(wǎng)膜

2、厚度，取黃斑中央?yún)^(qū)讀數(shù)為中央?yún)^(qū)視網(wǎng)膜厚度，取上方內(nèi)圈、鼻側(cè)內(nèi)圈、下方內(nèi)圈、顳側(cè)內(nèi)圈視網(wǎng)膜厚度平均值為旁中心內(nèi)圈視網(wǎng)膜厚度，取上方外圈、鼻側(cè)外圈、下方外圈、顳側(cè)外圈為旁中心外圈視網(wǎng)膜厚度，同時隨機選取10名正常志愿者作為正常對照。
　　 結(jié)果：先天性無虹膜家系(ANL)符合常染色顯性遺傳模式。ANL家系在相同的家庭條件下年齡大者較年齡小者最佳矯正視力(bestcorrectedvisualacuity,BCVA)差，而在相同年齡的

3、條件下則農(nóng)民家庭視力較工人家庭BCVA差?；颊咧醒?yún)^(qū)視網(wǎng)膜厚度為290.38±12.49μm，旁中心凹內(nèi)圈視網(wǎng)膜厚度為298.34±14.26μm，旁中心凹外圈視網(wǎng)膜厚度為267.22±11.27μm;與正常志愿者比較，前者P＜0.05，后兩者P＞0.05。先證者Ⅲ:9右眼晶體顳下方呈刀削狀，左眼行超聲乳化白內(nèi)障手術(shù)及折疊型人工晶體植入，術(shù)中體會前囊膜脆弱，術(shù)后眩光現(xiàn)象嚴重?；颊撷?16同時患精神分裂癥;患者Ⅳ:18同時患精神異常，但未

4、分型，還同時患先天性青光眼。患者Ⅳ:16是隨訪9人中殘存虹膜組織最多者，其左眼虹膜組織較右眼多，且在左眼瞳孔區(qū)鼻上方見瞳孔殘膜。
　　 結(jié)論：(1)先天性無虹膜癥ANL家系遺傳模式為常染色體顯性遺傳;(2)先天性無虹膜癥BCVA隨年齡下降可能與晶體混濁及視網(wǎng)膜的光損傷有關(guān);(3)先天性無虹膜癥黃斑中心凹發(fā)育不良主要表現(xiàn)為黃斑中央?yún)^(qū)明顯增厚，中心凹處存在除神經(jīng)纖維層以外的各層視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu);(4)先天性無虹膜患者晶體形態(tài)可發(fā)育異常，其

5、白內(nèi)障可能在達到某個程度后即迅速發(fā)展;(5)先天性無虹膜患者白內(nèi)障手術(shù)時需綜合考慮前囊膜脆弱及術(shù)后視覺質(zhì)量問題;(6)先天性無虹膜ANL家系內(nèi)存在虹膜形態(tài)及精神疾病的表現(xiàn)型變異;(7)先天性無虹膜患者瞳孔殘膜為發(fā)病機制的虹膜組織萎縮過多學說提供支持。
　　 第二章中國一個常染色體顯性遺傳先天性無虹膜癥家系PAX6基因序列及外顯子拷貝數(shù)測定
　　 目的：確定中國一個常染色體顯性遺傳先天性無虹膜癥家系PAX6基因啟動子區(qū)、外

6、顯子、外顯子與內(nèi)含子交界處是否存在基因變異以及外顯子拷貝數(shù)是否有變化。
　　 方法：提取中國一個常染色體顯性遺傳先天性無虹膜家系A(chǔ)NL先證者Ⅲ:9基因組DNA，采用PCR擴增直接測序法測定其PAX6基因3個轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體的2個啟動子區(qū)、5'端非編碼區(qū)(5'-untranslatedregion，5'-UTR)、編碼區(qū)(codingregion)、3'端非編碼區(qū)(3'-untranslatedregion，3'-UTR)以及剪接位點的

7、DNA序列，采用實時定量PCR(real-timequantitativePCR，qPCR)方法測定3個轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體所有外顯子拷貝數(shù)，qPCR采用△△Ct相對定量數(shù)據(jù)分析方法。
　　 結(jié)果：先證者Ⅲ:9的PAX6基因在轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體3啟動子區(qū)檢測到4個已報道的單核苷酸多態(tài)性(Singlenucleotidepolymorphism，SNP)rs1806155、rs5790870、rs1806156、rs1806157和rs180618

8、0，并檢測到1個未報道為SNP但與疾病表型無共分離現(xiàn)象的堿基替換g.-1217C＞T;在第12號內(nèi)含子檢測到1個SNPrs3026393;在3'-UTR檢測到1個SNPrs1506。轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體1和轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體2啟動子區(qū)因GC含量過高導(dǎo)致PCR經(jīng)反復(fù)優(yōu)化條件仍擴增失敗。PAX6基因3個轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體各外顯子拷貝數(shù)均為雙拷貝。
　　 結(jié)論：先天性無虹膜家系A(chǔ)NL的致病突變與PAX6外顯子及外顯子內(nèi)含子交界處序列及拷貝數(shù)變異無關(guān)，與轉(zhuǎn)錄異構(gòu)

9、體3啟動子區(qū)無關(guān)，但不能排除是否與轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體1和轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體2啟動子區(qū)有關(guān)。
　　 第三章中國一個常染色體顯性遺傳先天性無虹膜癥家系的基因連鎖定位
　　 目的：先天性無虹膜家系A(chǔ)NL的致病基因是否與PAX6基因有關(guān)。
　　 方法：提取中國一個常染色體顯性遺傳先天性無虹膜家系A(chǔ)NL的2個分支現(xiàn)存21人基因組DNA，并在PAX6基因附近選取6個微衛(wèi)星標記D11S904、D11S1324、D11S914、D11S1776

10、、D11S907和D11S935進行連鎖分析，采用LOD值兩點連鎖分析，并構(gòu)建單體型。
　　 結(jié)果：6個微衛(wèi)星標記中在PAX6基因下游微衛(wèi)星標記D11S1324取得LOD最大值3.16(θ=0)，且其附近標記物的LOD值均在θ=0時取得大于1的正數(shù)。單體型分析表明6個微衛(wèi)星標記構(gòu)成的區(qū)域在家系中呈現(xiàn)出與疾病表型共分離現(xiàn)象。
　　 結(jié)論：先天性無虹膜癥家系A(chǔ)NL的致病基因定位與PAX6基因附近，并且位于PAX6基因下游的可