Rab23通過Hedgehog信號通路抑制乳腺癌細胞生長和增殖.pdf

1、【背景】
　　乳腺癌是一種女性常發(fā)惡性腫瘤，我們的前期工作及國內(nèi)外的相關報道均證實，乳腺癌的發(fā)生與Hedgehog信號通路的過度激活有著密切的聯(lián)系。Rab23是2001年發(fā)現(xiàn)的一個新的Hedgehog信號通路負調(diào)節(jié)分子，研究表明Rab23可能是位于細胞跨膜蛋白SMO和轉錄因子Gli傳導通路之間的負性調(diào)節(jié)信號分子，抑制通路信號向Gli的傳遞。本研究首次闡明了Rab23分子在乳腺癌細胞中的表達及通過Hedgehog信號通路對乳腺癌細胞

2、生長增殖的抑制作用，而且這種抑制作用與乳腺癌ER+/ER-可能無相關性，進一步豐富了乳腺癌的發(fā)病機理的研究，為臨床治療乳腺癌提供了一條新思路。
　　【目的】
　　明確Rab23分子在不同類型的乳腺癌細胞中是否表達及表達量情況，探討Rab23分子對乳腺癌細胞生長增殖的作用及機制，討論Rab23對Hedgehog信號通路的具體作用。
　　【方法】
　　1.運用RT-PCR和免疫熒光化學技術檢測Rab23分子在乳腺癌細

3、胞系和正常乳腺細胞中的表達。
　　2.運用質(zhì)粒轉染和RNAi技術分別提高和降低Rab23分子在三種乳腺癌細胞中的表達。
　　3.運用克隆形成試驗和MTT試驗檢測Rab23對乳腺癌細胞生長的影響。
　　4.運用BrdU摻入試驗檢測Rab23對乳腺癌細胞DNA合成的影響。
　　5.運用流式細胞技術檢測Rab23對乳腺癌細胞凋亡的影響。
　　6.運用RT-PCR技術檢測Rab23對Hedgehog信號通路中的Gl

4、i1、Gli2的作用。
　　【結果】
　　1.RT-PCR結果顯示在正常乳腺細胞和乳腺癌細胞系中均有Rab23mRNA的表達，且在MCF-7細胞中表達量最少，其次為HBL-100細胞，表達量最多的是MDA-MB-231和Bcap-37（P＜0.05），后兩者比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　2.免疫熒光染色提示Rab23分子主要分布在乳腺癌細胞胞核周圍的胞質(zhì)中。
　　3.克隆形成實驗提示，上調(diào)Rab23可顯

5、著減少乳腺癌細胞系集落形成數(shù)量，上調(diào)Gli1其集落形成數(shù)量明顯增加。
　　4.BrdU摻入實驗提示，上調(diào)Rab23可顯著減少乳腺癌細胞的DNA合成，而下調(diào)Rab23可顯著提高乳腺癌細胞的DNA合成。
　　5.MTT實驗顯示，上調(diào)Rab23可顯著抑制乳腺癌細胞生長，而下調(diào)Rab23可顯著促進乳腺癌細胞生長。
　　6.流式細胞術顯示上調(diào)Rab23可增加乳腺癌細胞凋亡。
　　7.RT-PCR結果顯示，上調(diào)Rab23可顯