基因芯片技術(shù)檢測TSA誘導(dǎo)MOLT-4細胞凋亡的基因表達的改變TSA增強人卵巢癌順鉑耐藥株C13-對順鉑敏感性的體外研究.pdf

1、目的：利用基因芯片技術(shù)檢測TrichostatinA(TSA)誘導(dǎo)MOLT-4細胞凋亡的基因表達的改變，分析、鑒定、驗證與凋亡相關(guān)差異表達基因。 方法：確定不同濃度、時間TSA處理人白血病細胞株MOLT-4后凋亡發(fā)生的進程，選擇200nmol/L濃度TSA誘導(dǎo)MOLT-4細胞凋亡，分別收集9、18h時段細胞制備人14K基因表達譜芯片，對基因芯片結(jié)果加以分析、篩選，選擇差異表達顯著的基因STAT5a用RT-PCR和westernb

2、lot予以驗證，并對其機制作初步的探討。結(jié)果：200nmol/LTSA誘導(dǎo)的MOLT-4細胞凋亡在8h啟動，于36h達到高峰。分別于9、18h收集細胞，提取RNA后進行基因芯片分析。所得的結(jié)果經(jīng)過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，MOLT-4細胞差異表達基因隨著TSA作用時間的延長而增加，DAPK3、STK4、TNFRSF25、IER3等一批基因與凋亡的發(fā)生相關(guān)。選定STAT5a加以驗證證實在TSA處理MOLT-4細胞后其基因和蛋白水平一定時間內(nèi)有不

3、同程度的下調(diào)。反義寡核苷酸封閉MOLT-4細胞中STAT5a后經(jīng)200nmol/LTSA處理，MOLT-4細胞凋亡率較未經(jīng)反義封閉的TSA處理的MOLT-4細胞有顯著上升(p＜0.05)。 結(jié)論：TSA引起MOLT-4細胞基因表達的顯著變化，STAT5a介導(dǎo)了TSA誘導(dǎo)的MOLT-4細胞的凋亡。 課題二 TSA增強人卵巢癌順鉑耐藥株C13*對順鉑敏感性的體外研究 目的：本研究探討組蛋白去乙?；敢种苿﹖r

4、ichostatinA(TSA)聯(lián)合化療藥物順鉑(DDP)處理人卵巢癌順鉑耐藥株C13*的協(xié)同效應(yīng)。 材料和方法：MTT法觀察TSA、DDP、TSA+DDP對C13*細胞增殖的影響；克隆形成實驗分別檢測DDP、TSA+DDP處理C13*的克隆形成率；流式細胞儀檢測凋亡和分析細胞周期；Hochest33258觀察凋亡細胞形態(tài)。 結(jié)果：40nmol/LTSA處理C13*12h，細胞的凋亡率為2.99％，MTT顯示生長未受明顯