IGF-1基因轉(zhuǎn)染對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生物活性的影響.pdf

1、背景:
　　間充質(zhì)干細(xì)胞作為一種具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞已經(jīng)廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)驗(yàn),其在細(xì)胞治療領(lǐng)域展現(xiàn)了良好的前景。而脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cell,ADMSCs)由于具有來源廣泛,取材方便,體外可大量擴(kuò)增等優(yōu)點(diǎn)而越來越被大家所接受。但是干細(xì)胞移植仍然面臨許多問題,其中之一為植入細(xì)胞滯留率和存活率低下。目前有許多手段可用于提高干細(xì)胞的活性及

2、移植效應(yīng),包括移植前預(yù)處理、改變移植途徑、基因修飾等。其中基因修飾引起了人們的興趣,通過促進(jìn)或抑制基因的表達(dá)進(jìn)一步提高干細(xì)胞的治療作用。然而可用于基因修飾的基因以及介導(dǎo)載體種類繁多,因此選擇合適的基因以及攜帶基因的載體成為了提高干細(xì)胞移植效應(yīng)亟待解決的問題。
　　目的:
　　研究IGF-1基因轉(zhuǎn)染對(duì)ADMSCs生物活性的影響,并對(duì)其凋亡機(jī)制做初步研究。旨在為提高ADMSCs的活力和治療效果,并最終應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3、r>　　方法:
　　分離、培養(yǎng)并鑒定ADMSCs,用攜帶IGF-1基因的慢病毒載體感染ADMSCs。實(shí)驗(yàn)分為ADMSCs,ADMSCs-GFP,ADMSCs-IGF三組,于病毒感染后四天收集細(xì)胞上清液和蛋白,行ELISA和Western-blot,測(cè)定各組中上清液IGF-1的分泌情況以及蛋白中Akt和P-Akt的表達(dá)。用MTT法測(cè)定各組細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并繪制生長(zhǎng)曲線,用annexin-V測(cè)定各組細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:
　

4、　成功分離、培養(yǎng)了大鼠ADMSCs,表型鑒定CD31、CD34、CD45表達(dá)陰性,CD29及CD90表達(dá)陽(yáng)性。ADMSCs經(jīng)過誘導(dǎo)可以向骨,脂肪和心肌細(xì)胞分化。IGF慢病毒表達(dá)載體感染脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察到持續(xù)表達(dá)的綠色熒光。ADMSCs-GFP和ADMSCs-IGF組的凋亡率明顯高于ADMSCs組,而ADMSCs-GFP與ADMSCs-IGF相比,前者的凋亡率要高于后者。MTT法顯示ADMSCs-IGF可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng),

5、在第5,6天時(shí)顯著高于其他倆組。ADMSCs可以通過旁分泌的形式分泌IGF-1,而ADMSCs-IGF組進(jìn)一步促進(jìn)了IGF-1的分泌,并且與時(shí)間成正相關(guān)。AKT在三組均表達(dá)但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但ADMSCs-IGF促進(jìn)了P-Akt的表達(dá)水平,與其他組相比具有顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　1.成功分離培養(yǎng)了ADMSCs,并用IGF-1慢病毒載體成功轉(zhuǎn)染ADMSCs;
　　2.IGF-1基因修飾ADMSCs可以使IGF-1持續(xù)