鼻咽癌腫瘤干細胞分化中的代謝重編程與上皮-間質(zhì)轉化.pdf

1、[目的]
　　 鼻咽癌為我國華南地區(qū)常見的惡性腫瘤之一，因為缺乏對復發(fā)及轉移的有效控制，近年來在提高患者長期生存率方面遇到了瓶頸。傳統(tǒng)的放化療手段無法完全消除腫瘤，因其僅殺滅了已分化的低致瘤性癌細胞，而殘留的真正致瘤的腫瘤干細胞成為復發(fā)和轉移的根源。從鼻咽癌細胞中分離出腫瘤干細胞，研究其在體內(nèi)體外的生物學特性，探索鼻咽癌腫瘤干細胞在分化激活的過程中，發(fā)生的代謝重編程與上皮-間質(zhì)轉化，為尋找早期診斷方法及特異性的治療手段提供新的思

2、路。
　　 [方法]
　　 (1)利用克隆形成實驗驗證細胞的轉移生長能力，藥物毒性實驗驗證細胞的多藥耐藥性，裸鼠移植瘤實驗驗證細胞的體內(nèi)致瘤性，q-RT-PCR、WB及免疫組化實驗觀察細胞在體內(nèi)體外腫瘤干細胞相關基因的表達情況。
　　 (2)利用臺盼藍染色計數(shù)及細胞周期分析觀察細胞的增殖情況與細胞周期分布，利用JC-1染色法和ATP定量檢測等方法證觀察細胞線粒體氧化磷酸化的功能，利用乳酸定量檢測與乳酸脫氫酶活性檢

3、測等方法觀察細胞糖酵解的活性水平，利用體外血管生成實驗等方法觀察細胞分泌上清誘導血管生成的能力，利用q-RT-PCR、WB及免疫組化實驗探索可能的信號通路機制。
　　 (3)利用懸浮培養(yǎng)成球?qū)嶒炗^察細胞的干細胞性質(zhì)，利用Transwell遷移運動實驗觀察細胞遷移運動能力，利用Transwell侵襲實驗觀察細胞侵襲能力，利用吉姆薩-瑞氏染色觀察細胞形態(tài)學的變化，并利用q-RT-PCR和WB實驗驗證細胞上皮-間質(zhì)轉化的相關基因表達情

4、況。
　　 [結果]
　　 (1)與CNE-2相比，CNE-2S具有更強的克隆形成能力，對多種臨床常用抗癌藥均具明顯的耐藥性，及更強的體內(nèi)致瘤能力，并高表達Oct4、Sox2及Nanog等腫瘤干細胞特征性轉錄因子。
　　 (2)經(jīng)血清誘導分化的CNE-2S-I出現(xiàn)了增殖激活的現(xiàn)象，且能在長期的體內(nèi)培養(yǎng)過程中保持高增殖能力，產(chǎn)生的原因與細胞周期相關蛋白的表達變化有關。
　　 (3)經(jīng)血清誘導分化的CNE-2

5、S-I出現(xiàn)了代謝重編程，并增強了誘導血管生成能力。代謝重編程表現(xiàn)為線粒體氧化磷酸化功能的降低和糖酵解能力的加強,而血管生成能力增強可能與HIF介導的代謝重編程有關。
　　 (4)經(jīng)血清誘導分化的CNE-2S-I喪失了腫瘤干細胞的特性但獲得了更強的遷移運動和侵襲能力，并伴隨著上皮-間質(zhì)轉化的發(fā)生。
　　 [結論]
　　 實驗表明，本課題組分離得到的CNE-2S亞群細胞具有腫瘤干細胞的特性，可以作為鼻咽癌腫瘤干細胞的