內皮素1基因多態(tài)性與兒童青少年骨肉瘤化療耐藥風險的相關性分析.pdf

1、目的:本研究首次在病例對照研究中探索ET-1的SNP位點和單倍型與兒童及青少年骨肉瘤的化療耐藥風險之間的關系。為證明ET-1基因的SNP和單倍型與兒童及青少年骨肉瘤化療耐藥的風險變化之間存在相關關系，提供了第一手的證據(jù)，從而為化療耐藥的兒童及青少年骨肉瘤患者在病理生理學和治療上提出了全新的觀念。
　　方法:本研究分三部分;1.用350對年齡、性別、腫瘤位置和發(fā)展階段相匹配的兒童青少年骨肉瘤患者進行研究。2.苯酚/氯仿法從白細胞中分

2、離出基因組DNA，并存儲在400毫升的TE中(10mMTris/HCl和1mM EDTA的溶液(pH8.0)。ET-1基因單核苷酸多態(tài)性的檢測是通過ABI3700 DNA分析儀（Applied Biosystems）上進行毛細管電泳寡核苷酸連接測定。對檢測結果進行Hardy-Weinberg平衡檢驗、將rs1800541和rs2070699進行配對LD試驗，計算使用HaploView程序，并對所得進行統(tǒng)計學分析;3.將患者手術切除的骨肉

3、瘤標本進行POCC，對POCC進行傳代培養(yǎng)，實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)測定ET-1 mRNA水平，并通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)對POCC上清液中細胞分泌的ET-1水平進行測定，觀察腫瘤壞死百分比。
　　結果:
　　1.發(fā)現(xiàn)在年齡、性別及腫瘤位置和發(fā)展階段沒有顯著的差異（表1）。同時在病例組和對照組之間，在體重指數(shù)(BMI)、收縮壓、舒張壓、血漿ET-1的水平亦無顯著差異（表1）。
　　2.在三個

4、SNPs中，對照組中的rs5370明顯偏離了Hardy-Weinberg平衡。
　　3.在rs1800541上的G等位基因與新輔助化療的弱反應或者化學耐藥性的風險降低有顯著相關性(P＜0.01)，而位于rs2070699上的G等位基因與耐藥風險增加相關的傾向并不明顯，P值位于臨界水平(P=0.06)。
　　4.rs1800541和rs2070699存在較強LD關系（病例組，D'=0.940，r2=0.885;對照組，D'=0

5、.925，r2=0.860）。
　　5.2-SNP單倍型TG在病例組中比對照組的顯著相關性更常見（P=0.012，校正OR，1.82，95％CI，1.10-5.65），而2-SNP單倍型GT在對照組中比病例組中的顯著相關性更常見(P=0.009，調整后的OR,0.25,95％CI,0.14-0.84)。
　　6.在化療耐藥兒童及青少年骨肉瘤患者中，骨肉瘤細胞分泌的ET-1水平與腫瘤壞死的百分比具有顯著的負相關關系。
　

6、　結論:
　　1.兒童青少年骨肉瘤患者在化療后腫瘤壞死與年齡，性別及腫瘤的位置及階段、體重指數(shù)(BMI)、收縮壓、舒張壓、血漿ET-1無相關性。
　　2.rs5370與兒童青少年骨肉瘤化療耐藥的風險無明顯相關性。
　　3.rs1800541上的G等位基因與新輔助化療的弱反應或者化學耐藥性的風險降低有顯著相關性，而位于rs2070699上的G等位基因與耐藥性風險增加有相關性的傾向不明顯。
　　4.rs1800541